梅花鹿胎盘免疫调节因子及其体外活性研究 毕业论文

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1、分类号：单位代码：10140密级：公开学号：403071289硕士学位论文梅花鹿胎盘免疫调节因子及其体外活性研究论文题目：BioactivityAssayofCervinePlacentalImmuneRegulatorFactorInVitro英文题目：论文作者：指导教师：专业：食品科学完成时间：二O一O年五月申请辽宁大学硕士学位论文梅花鹿胎盘免疫调节因子及其体外活性研究BioactivityAssayofCervinePlacentalImmuneRegulatorFactorInVitro作者：指导教师：专业：食品科

2、学答辩时间：二O一O年五月二○一○年五月·中国辽宁辽宁大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的。论文中取得的研究成果除加以标注的内容外，不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中进行了标注，并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的

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4、在临床可替代人胎盘，具有巨大应用潜力。本研究以梅花鹿胎盘为原料，通过透析、超滤等技术制备具有生物活性的小分子活性物质——鹿胎免疫调节因子（cervineplacentalimmuneregulatorfactor,CPIRF）。通过正交试验，对超声功率、固液比、超声时间、丙酮量等因素进行优化，确定最优化的条件。利用鼠脾淋巴细胞增殖试验、Ea玫瑰花环试验评价其免疫活性，利用MTT法评价其抑瘤活性。研究结果如下：（1）CPIRF制备条件优化：以超声功率、固液比、超声时间、丙酮量为四因素设计正交试验，结果表明：超声功率影响最大，

5、丙酮量和超声时间其次，固液比影响最小。以鹿胎盘提取液多肽含量为指标，确定最优化制备条件为：超声功率400w、固液比1:1、超声时间120s、丙酮量1:3（提取液:丙酮）。之后利用透析（或超滤）方法制备得到微黄色透明液体的CPIRF。（2）CPIRF成分分析：利用Folin-酚法、苯酚-硫酸法、钒钼酸铵显色法分别测定CPIRF中的多肽、多糖和核酸含量。结果表明：CPIRF含有3.7±0.04mg/ml多肽，3.3±0.07μg/ml核酸，0.54±0.002mg/ml多糖。（3）免疫活性评价：利用鼠脾淋巴细胞增殖试验、Ea玫

6、瑰花环试验评价CPIRF免疫活性。在4μg/ml-0.4ng/ml，具有鼠脾淋巴细胞增殖活性。当40ng/ml时，增殖率可达95.33%。Ea玫瑰花环试验具有浓度依赖性，4μg/ml时，Ea玫瑰花环成环率最高，达47%。结果表明，CPIRF具有良好的免疫调节和免疫增强作用。（4）体外抑瘤活性评价：以MTT法评价CPIRF对宫颈癌Hela细胞株和大肠癌CX-1细胞株的体外抑瘤活性。CPIRF可显著抑制Hela细胞株和CX-1细胞株的生长，最佳抑瘤浓度为4ng/ml，Hela细胞株和CX-1细胞株的抑瘤率分别为72.4%和50

7、.3%，表明CPIRF具有较强的体外抑瘤活性。综上所述，本研究通过制备条件优化，获得具有抗肿瘤活性和免疫活性的CPIRF。该制备条件简单，所得到的CPIRF很好的保持了原有生物学活性，有利于开发高附加值功能食品和药品。这为解决当前鹿产品生产中存在的加工粗糙、产品初级、种类单一等问题，提供了科学依据，该研究对于鹿产业链的形成、发展、壮大，促进鹿产业的发展具有重要意义。关键词：梅花鹿胎盘，免疫调节因子，正交试验，制备条件，生物学活性IAbstractABSTRACTRecentresearchesshowedthatcervi

8、neplacentacontainedmanycompositionsincludingproteins,hormones,enzymes,antibodies,phospholipids,growthfactors,cytokinesandsmallmoleculeswhichcouldstimula