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《在交变电场下固定化胰蛋白酶催化活性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、在交变电场下固定化胰蛋白酶催化活性的研究张然1王肇君2(1天津医学高等专科学校300222；2中海油天津化工研究设计院300131)【摘要】酶作为一种生物催化剂具有高效、高选择性、催化反应条件温和、无污染等特点，在食品、医药和化工等产业中的得到了广泛认同。近年来，酶的固定化技术的发展使游离酶不稳定和易变性等缺点得以克服。木实验通过利用包埋■交联法将胰蛋白酶固定化，在不同频率的电刺激下，分析交变电场对固定化胰蛋白酶催化活性的影响。研究表明包埋■交联法固定化胰蛋白酶性能较理想，在交变电场下固定化的胰蛋白酶催化苯甲
2、酰・L■精氨酸乙酯(BAEE)时，不同频率下的吸光度有明显变化，说明改变反应体系所在的交变电场频率可以改变固定化胰蛋白酶的活性。【关键词】胰蛋白酶固定化催化活性交变电场【中图分类号】R392【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)11-0117-03近年来，胰蛋白酶广泛应用于食晶、医药、化工行业，由于液相胰蛋白酶自身降解作用，使酶促反应难以控制，催化效率下降，不利于产物的提纯精致，以致成木提高，因此国内外对胰蛋白酶的固定化做了大量的研究。⑴研究表明，固定化酶的稳定性大大增强，催化效率较高，易
3、于产物的分离纯化，木文通过实验找出了胰蛋白酶的固定化的最适条件，同时发现在不同的交变电场频率下可以有效刺激胰蛋白酶的催化活性。1实验仪器及试剂1.1实验仪器台式恒温振荡器；紫外■可见分光光度计；计算机；烧杯；电子天平；200目筛子；电冰箱；加热型磁力搅拌器；频率发生器。1.2实验试剂亚甲基双丙烯酰胺；四甲基乙二镀；过硫酸鞍；聚2■丙烯酰胺2甲基亠丙烷磺酸(PAMPS)；胰蛋白酶；NaOH；HCI；磷酸氢二钠；磷酸二氢钠；BAEE；纯净水；丙酮。2实验方法2.1实验原料的制备a.称取磷酸氢二钠71.64g放于烧
4、杯中,加适量纯净水,40-50°C之间溶解，待药品完全溶解后定容于1000ml容量瓶。b.称取磷酸二氢钠3.1184g放于烧杯中,加适量纯净水,40-50°C之间溶解,待药品完全溶解后定容于1000ml容量瓶。c・分别取53ml的磷酸氢二钠溶液和53ml磷酸二氢钠溶液,加入到1000ml容量瓶中充分混合。2.2膜蛋白酶的固定化方法的筛选2.2.1PAMPS固定化酶的催化活性用PAMPS固定胰蛋白酶来催化BAEE的水解反应［2］。吸光度随反应时间的变化如表lo表1不同时间BAEE的吸光度A253由⑴可得&alp
5、ha;=0.376,β=1.188,计算得δ二3.007,将α>β和δ的值代入方程可得PAMPS固定化胰蛋白酶催化BAEE水解的反应初速度V0=0.1053。2.2.2PMAA固定化酶的催化活性用聚丙烯酸甲酯(PMAA)固定化胰蛋白酶催化BAEE水解。吸光度随反应吋间的变化如表2所示。表2不同频率不同时间下BAEE的吸光度A253时间(min)A253Acat-Acontrol用PMAA固定的胰蛋白酶催化(Acat)用PMAA催化(Acontrol)00
6、.0000.0000.00010.0720.0160.05630.1250.0710.05450.2530.0940.159100.3190.1120.207150.4180.1220.296200.4660.1310.335300.4780.1310.347500.5080.1310.377冋归后的标准二次曲线如图2所示。得α=0.376,β=1.188,由方程可得δ=3.007,计算可得其反应初速度V0=0.0117,PAMPS固定化胰蛋白酶催化BAEE水解要比PMAA固
7、定化胰蛋白酶效果好，在后续研究中包埋胰蛋白酶聚合物选用PAMPS法。2.3PAMPS法固定化胰蛋白酶a.称取PAMPS5.0008g、亚甲基双丙烯酰胺1.5004g放于100ml烧杯中混合，加入50ml配备好的缓冲溶液，加热待其完全溶解后,加入过硫酸镀0.2503g,充分溶解后,NaOH粉末调节pH至7.0o[3]b.过滤掉上述溶液杂质后,加入胰蛋白酶O.lOOlg,加热搅拌溶解，待完全溶解后，用滴管加入引发剂四甲基乙二镀1滴（约14.7mg）,继续搅拌至溶液胶联成淡黄色胶体。c・取出淡黃色胶体，放入研钵研成
8、颗粒状，丙酮润洗4・5遍，润洗过程中用玻璃棒猛烈搅拌，将胶体中的水分离出来。胶体完全干燥后，放入研钵中继续研磨，直到粉末能通过200目筛。将筛过的粉末再放入烧杯中用纯净水润洗3・4遍后之后丙酮润洗4・5遍，丙酮溶液应过量于待润洗的粉末量，待把粉末中的水分完全分离岀来后，将粉末放于通风处干燥，干燥后的粉末即为固定化胰蛋白酶。2.4不同交变电场频率下胰蛋白酶的催化活性⑷用PAMPS法制作的固定化胰蛋白酶
