SN2008-2007-进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法高效液相色谱法.pdf

《SN2008-2007-进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法高效液相色谱法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２００８—２００７进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法高效液相色谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆犪狋狌犾犻狀犻狀犳狉狌犻狋犼狌犻犮犲犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犎犘犔犆犿犲狋犺狅犱２００７１２２４发布２００８０７０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２００８—２００７前言本标准附录Ａ和附录Ｂ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国陕西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孔祥虹、李建华、乐爱山、何学文、张莹、何强。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜

2、２００８—２００７进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法高效液相色谱法１范围本标准规定了果汁中棒曲霉毒素检验的高效液相色谱测定方法。本标准适用于苹果汁和梨汁中棒曲霉毒素含量的测定。２方法提要果汁（浊汁要用果胶酶预处理）中的棒曲霉毒素经乙酸乙酯萃取，萃取液用碳酸钠溶液净化后，经无水硫酸钠脱水，用液相色谱仪配紫外或二极管阵列检测器测定，外标法定量。３试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。３．１乙醇：液相色谱纯。３．２冰乙酸。３．３乙腈：液相色谱纯。３．４乙酸乙酯。３．５重铬酸钾。３．６浓硫酸：０．００９ｍｏｌ／Ｌ，１ｍＬ浓硫酸用水稀释至２Ｌ。３．７果胶酶溶液（ｅｎｄｏｇａｌａｃｔｕｒｏｎａ

3、ｓｅ）：活度为１４００Ｕ／ｇ。活度定义：在ｐＨ３．４和２５℃时，１％的果胶溶液在酶的催化作用下，５ｍｉｎ内粘度降低２０％所需果胶酶的量。３．８无水硫酸钠：经６５０℃灼烧４ｈ，置于干燥器内备用。３．９碳酸钠溶液：１５ｇ／Ｌ，１．５ｇ无水碳酸钠溶于１００ｍＬ水中。３．１０ｐＨ４．０水：重蒸馏水，用乙酸调节至ｐＨ为４．０。３．１１棒曲霉毒素标准品：纯度大于等于９９％。３．１２棒曲霉毒素标准储备液：用５ｍＬ乙酸乙酯溶解５ｍｇ棒曲霉毒素后，移入２５ｍＬ的容量瓶，乙酸乙酯定容至刻度，配成浓度约为２００／ｍＬ的标准储备液，在－２０℃冷冻保存。棒曲霉毒素标准溶液μｇ浓度的标定参见附录Ａ。３．１３棒曲霉毒素标准

4、工作液：取５００μＬ的经标定过的棒曲霉毒素标准溶液（相当于５μｇ），用氮气吹干后溶解于５ｍＬｐＨ４．０水中，配成浓度为１／ｍＬ，根据需要再用ｐＨ４．０水稀释，配成适当浓度的标μｇ准工作液。４仪器和设备４．１高效液相色谱仪：配紫外或二极管阵列检测器。４．２离心机：５０００ｒ／ｍｉｎ。４．３离心管：５０ｍＬ，具塞。４．４旋转蒸发器。１犛犖／犜２００８—２００７４．５分液漏斗：１５０ｍＬ。４．６微量可调移液器：５０μＬ，２００μＬ，１０００μＬ。４．７滤膜：０．４５μｍ。４．８水浴锅；可调温。４．９旋涡混匀器。４．１０阿贝折光计。５试样制备与保存将所取试样充分混匀后，分取出约１ｋｇ代表性样品，均分成

5、两份，装入洁净的容器内，作为试样。密封并标明标记。将试样于４℃条件下避光保存。注：在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生棒曲霉毒素含量的变化。６测定步骤６．１样品处理浓缩果汁（稀释至可溶性固形物为１１．５Ｂｒｉｘ）和清汁不需要酶处理。取浊汁２０ｍＬ（准确至０．１ｍＬ）于５０ｍＬ离心管中，加入１５０μＬ果胶酶溶液，在旋涡混匀器上混匀２ｍｉｎ，在５０℃水浴锅中加热１ｈ，于４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。６．２提取和净化量取１０ｍＬ（准确至０．１ｍＬ）试样（浊汁经酶解处理），置于５０ｍＬ离心管中，加入２０ｍＬ乙酸乙酯振摇提取１ｍｉｎ，静止分层，分出水相于另一个５０ｍＬ离心管中，再用乙酸乙酯提取

6、水相两次，每次２０ｍＬ。弃去水相，合并三次乙酸乙酯提取液于分液漏斗中，加入４．０ｍＬ碳酸钠溶液，立即振摇０．５ｍｉｎ，静止分层（棒曲霉毒素在碱性溶液不稳定，因此，净化操作应尽快，以免损失）。上层有机相过装有１５ｇ无水硫酸钠的漏斗至浓缩瓶中；碳酸钠水层用１０ｍＬ乙酸乙酯提取一次，弃去碳酸钠水层，过无水硫酸钠柱至浓缩瓶中，在４０℃水浴中用旋转蒸发器浓缩至近干，以１．００ｍＬｐＨ４．０的水溶解残留物，经过０．４５滤膜过滤后供液相色谱测定。μｍ６．３测定６．３．１液相色谱条件ａ）色谱柱：Ｃ１８柱，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），粒径５μｍ，或相当者；ｂ）流动相：乙腈水（１０∶９０，体积比）；ｃ）流速

7、：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）柱温：室温；ｅ）检测波长：２７６ｎｍ；ｆ）进样量：２０μＬ。６．３．２色谱测定根据样液中棒曲霉毒素的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中棒曲霉毒素的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在选定的分析条件下，对标准工作溶液和测定样液等体积参插进样测定，棒曲霉毒素的保留时间约为９．３６ｍｉｎ。标准品色谱图参见附录Ｂ中图Ｂ．１。６．４空白试验除不加试样外，均