GBT4789.16-1994-食品卫生微生物学检验常见产毒霉菌的鉴定.pdf

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1、GB4789.16—1994中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验常见产毒霉菌的鉴定MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneIdentificationofcommonmycotoxinproducingfungiGB4789.16—19941主题内容与适用范围本标准规定了食品中常见的产毒霉菌的鉴定方法。本标准适用于曲霉属、青霉属、镰刀菌属及其他菌属的产毒菌种的鉴定。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3．1显微镜。3．2目镜测微计。3．3物镜测微计。3．4温箱。3．5冰箱。3．6无菌接

2、种罩。3．7放大镜。3．8酒精灯。3．9接种钩针。3．10分离针。3．11滴瓶。3．12载物玻片。3．13盖玻片：18mm×18mm。3．14小刀。4培养基和试剂4．1乳酸-苯酚液：按GB4789.28中3.24规定。4．2察氏培养基：按GB4789.28中4.77规定。4．3马铃薯-葡萄糖琼脂培养基：按GB4789.28中4.79规定。4．4马铃薯琼脂培养基：按GB4789.28中4.80规定。4．5玉米粉琼脂培养基：按GB4789.28中4.82规定。5操作步骤5．1菌落的观察：为了培养完整的巨大菌落以供观察记录，可将纯培养物点植于平板上。方法是：将平板倒转，向上接种

3、一点或三点，每菌接种两个平板，倒置于25～28℃温箱中进行培养。当刚长出小菌落时，取出一个平皿，以无菌操作，用小刀将菌落连同培养基切下1cm×2cm的小块，置菌落一侧，继续培养，于5～14d进行观察。此法代替小培养法，可直接观察子实体着生状态。5．2斜面观察：将霉菌纯培养物划线接种（曲霉、青霉）或点种(链刀菌或其中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.16—1994他菌）于斜面，培养5～14d，观察菌落形态，同时还可以将菌种管置显微镜下用低倍镜直接观察孢子的形态和排列。5．3制片：取载玻片加乳酸-苯酚液一滴，用接种针钩取一小块霉菌

4、培养物，置乳酸-苯酚液中，用两支分离针将培养物撕开成小块，切忌涂沫，以免破坏霉菌结构。然后加盖玻片，如有气泡，可在酒精灯上加热排除。制片时最好是在接种罩内操作，以防孢子飞扬。5．4镜检：观察霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等，幷做详细记录。5．5报告：根据菌落形态及镜检结果，参照以下各种霉菌的形态描述及检索表，确定菌种名称。6各种霉菌的形态特征6．1曲霉属（Aspergillus）本属的产毒霉菌主要包括黄曲霉、寄生曲霉、杂色曲霉、构巢曲霉和棕曲霉。这些霉菌的代谢产物为黄曲霉毒素、杂色曲霉素和棕曲霉毒素。曲霉属的颜色多样，而且比较稳定。营养菌丝体由具横隔的分枝菌丝构

5、成，无色或有明亮的颜色，一部分埋伏型，一部分气生型。分生孢子梗大都无横隔，光滑、粗糙或有麻点。梗的项端膨大形成棍棒形、椭圆形、半球形或球形的项囊，在项囊上生出一层或二层小梗，双层时下面一层为梗基，每个梗基上再着生两个或几个小梗。从每个小梗的项端相继生出一串分生孢子。由项囊、小梗以及分生孢子链构成一个头状体的结构，称为分生孢子头。分生孢子头有各种不同颜色和形状，如球形、放射形、棍棒形或直柱形等。曲霉属只少数种形成有性阶段，产生封闭式的闭囊壳。某些种产生菌核或菌核结构。少数种可产生不同形状的壳细胞。6．1．1黄曲霉（A.flavus）属于黄曲霉群。在察氏琼脂培养基上菌落生长较

6、快，10～14d直径3～4或4～7cm，最初带黄色，然后变为黄绿色，老后颜色变暗，平坦或有放射状沟纹，反面无色或带褐色。在低倍显微镜下观察可见分生孢子头疏松放射状，继变为疏松柱状。分生孢子梗多从基质生出，长度一般小于1mm。有些菌丝产生带褐色的菌核。制片镜检观察可见分生孢子梗极粗糙，直径10～20μm。顶囊烧瓶形或近球形，直径10～65μm，一般多为25～45μm。全部顶囊着生小梗，小梗单层、双层或单、双层同时生在一个顶囊上；梗基6～10μm4～5.5μm。小梗6.5~10μm×3~5μm。分生孢子球形、近球形或稍作洋梨形，3～6μm，粗糙（见图1）。黄曲霉产生典曲霉毒素

7、，该毒素能引起动物急性中毒死亡，如长期食用含微量黄曲霉毒素的食物，能引起肝癌。图1黄曲霉1—双层上梗的分生孢子头；2—单层小梗的分生孢子头；3—分生孢子梗的基部（足细胞）；4—双层小梗的细微结构；5—分生孢子中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.16—19946．1．2寄考曲霉（A.parasiticus）亦属于黄曲霉群，8～10d菌落2.5～4cm，平坦或带放射状沟纹，幼时带黄色，老后呈暗绿色，反面奶油色至淡褐色。低倍显微镜下观察见分生孢子头疏松放射状，直径400～500μm，分生