酶联免疫吸附测定法在食品微生物快速检测中的应用

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1、对酶联免疫吸附测定法(ELISA)在食品微生物检测中的应用进行了分类论述，主要包括双抗体夹心法、间接法测抗体和竞争法在食品微牛物检测中的应用，对其应用前景作出了展望。关键字微生物；快速检测；ELISA食品的安全性是食品必需具备的基本要素，然而在食晶科技高度发展的今天，在世界各地仍不断发生各种各样的食品安全事故，食品安全问题再度成为人们关注的热点。近几年，屮国疾病预防控制屮心营养与食品安全所对全国部分省市的生肉、熟肉、乳和乳制甜、水产品、蔬菜中的致病菌污染状况进行了连续的动态监测，结果表明，微生物源性食物中毒占居首位，高达39.62%⑴。随着食品工业的发展以及对食品安全的重视

2、，传统分析方法己经远不能满足食品检测的需要，迫切需要灵敏度更高、特异性更强、简便快捷的食品安全检测技术和方法。因此，近年来世界各国的许多机构和学者都致力于快速检测技术和方法的研究，改进和开发了一些快速的检测技术和方法。快速检测及其自动化则是通过综合引用微生物学、化学、生物化学、生物物理学、免疫学以及血清学试验技术对微生物进行分离、检测、鉴定和计数。近年来，常用的微生物快速检测技术主要有6大类：一、载体法：包括快速测试片法、螺旋板系统法和滤膜法；二、代谢学技术：包括电阻抗法、微热量计技术和放射量技术；三、免疫学技术：包括免疫荧光技术(IFT)、酶联免疫吸附技术(ELISA)和

3、酶联荧光免疫吸附技术(VIDAS)；四、LAMP方法；五、分子生物检测方法：包括分子杂交、PCR和基因芯片；六、分析化学技术:包括高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、气相色谱•质谱联用(GC-MS)、液相色谱•质谱联用(LGMS/MS)等。其中酶联免疫吸附测定(EL1SA)以其简便、快速、灵敏、成本低、检测谱广等特点在食源性致病菌检测方面的应用也越来越受到人们的青睐。1.酶联免疫吸附测定法的原理和特点酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,简称ELISA)是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合起來的一种综合性技

4、术。1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标木中微量物质的测定方法。1.1ELISA的基本原理ELISA的基本原理是抗原抗体反应：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，乂保留酶的活性。③在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤

5、的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标木中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极犬地地放犬反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度［2〕。1.2ELISA的特点ELISA具有高度的敏感性和特异性，与常规的化学、牛物学的检测方法比较，具有以下特点:①检测吋间短，操作简便。由于抗原抗体免疫反应的特异性强，简化了样品的预处理和提取纯化过程，可同时检测数十甚至上百个样品；而酶具有高效催化的特性,

6、使得检测时间大大缩短，一般在几个小时内即可完成。②灵敏度高。ELISA可对受检标本做定性和定量测定，对于一般抗原的检测限可达ng甚至pg水平，对微生物的检测限可达102cfu/mL〜103cfu/mL⑶。③干扰性小。抗原抗体的免疫反应是特异性反应，抗体与抗原的结合是由抗原决定簇所决定，不同抗原的决定簇决定只有特异性抗体才可与之结合。因此它几乎不受其它因素如结构类似物等的影响。④安全性高，污染少。因为灵敏度高，标准品的浓度可以很低，有机溶剂用量较少，减少对检测人员和环境的潜在危害⑷。"ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或

7、抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。主要有双抗体夹心法、双位点一步法、间接法测抗体、竞争法、捕获法测IgM抗体和应用亲和素和生物素的ELISA等。食品工业中常用的主要是双抗体夹心法、间接法和竞争法。2.双抗体夹心法在食品微生物快速检测中的应用双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：(1)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。(2)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与