保健食品中9种水溶性维生素的测定（BJS 201716）.doc

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1、附件4保健食品中9种水溶性维生素的测定BJS2017161范围本方法规定了保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺含量的测定。2原理试样经水提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇：质谱级。3.1.2甲酸：质谱级

2、。3.1.3氨水：含量26%。3.1.4冰醋酸。3.1.5浓盐酸。3.1.6氨水（1+5）：量取100mL氨水（3.1.3）缓慢倒入500mL水中，混匀。3.1.7盐酸（0.01mol/L）：吸取9mL浓盐酸（3.1.5），溶于1000mL水中。吸取该溶液50mL，用水稀释并定容至500mL。3.1.80.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。3.1.90.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。3.2标准品维生素B1（硫胺素盐酸盐）、维生素B2、泛

3、酸（泛酸钙）、维生素B6（吡哆醇）、生物素、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（1mg/mL）3.3.1.1维生素B1标准储备液：称取维生素B1标准品（3.2）0.1g（精确至0.0001g），用0.01mol/L—5——盐酸（3.1.7）溶解并定容于100mL棕色容量瓶中。3.3.1.2维生素B2、生物素、叶酸标准储备液：分别称取生物素、叶酸标准品（3.2）0.1g（精确至0.0001g），加入30mL氨水

4、（3.1.6）溶解，甲酸调节pH值至7.0后，用水转移并定容至100mL棕色容量瓶中。3.3.1.3维生素B6、维生素B12、烟酸、烟酰胺、泛酸标准储备液：分别称取维生素B6、维生素B12、烟酸、烟酰胺和泛酸标准品（3.2）0.1g（精确至0.0001g），用水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中。3.3.2空白基质溶液的配制取空白试样按照试样制备方法（5.2）操作。3.3.3基质标准工作液3.3.3.1维生素B1基质标准工作液：准确吸取维生素B1标准储备液（3.3.1）适量，用空白基质溶液（3.3.2）将其稀释成含量分别为0.01µg

5、/mL、0.05µg/mL、0.1µg/mL、0.5µg/mL、1µg/mL的基质标准工作液。3.3.3.28种维生素基质混合标准工作液：准确吸取维生素B2、泛酸、生物素、维生素B6、叶酸、维生素B12、烟酸、烟酰胺标准储备液（3.3.1）适量，用空白基质溶液将其稀释成含量分别为0.01µg/mL、0.05µg/mL、0.1µg/mL、0.5µg/mL、1µg/mL的基质混合标准工作液。注：操作过程应在避光环境下进行。3.4微孔滤膜：0.22µm，有机相。1仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2超声波清洗器

6、。4.3分析天平：感量分别为0.01g和0.0001g。2分析步骤5.1试样制备将20粒片剂或胶囊试样粉碎后混匀，液体试样混合均匀。5.2试样提取准确称取混合均匀的试样2g（精确至0.01g）于50mL棕色容量瓶中，加入40mL水，超声10min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀，上清液经微孔滤膜（3.4）过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。注：操作过程应在避光环境下进行。5.3仪器参考条件5.3.1色谱条件—5——a）色谱柱：HSST3柱，1.8μm，100mm×2.1mm（内径），或性能相当者；b）流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3

7、.1.8），B为0.1%甲酸甲醇溶液（3.1.9），洗脱梯度见表1；c）流速：0.3mL/min；d）柱温：30℃；e）进样量：2μL。表1洗脱梯度时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0991399155958505010991159915.3.2质谱条件a）电离方式：电喷雾正离子模式。b）检测方式：多反应检测（MRM）。c）雾化气压力：45psi。d）离子喷雾电压：3500V。e）干燥气温度：300℃。f）干燥气流速：5L/min。g）定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表2。表2水溶性维生素的定性离子对、定量离子、碎裂

8、电压和碰撞能量中文名称母离子(m/z)子离子(m/z)碎裂电压(V)碰撞能量(eV)维生素B1265.1122.2*；144.110015；15维生素B2377.1243.1*；172.213525；32泛酸220.29