db51t 659-2007 牛奶中青霉素残留检测方法-酶联免疫吸附测定(elisa)法

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1、NY××××—××××DB四川省质量技术监督局发布2007-05-01实施2007-03-17发布牛奶中青霉素残留检测方法－酶联免疫吸附测定(ELISA)法DeterminationofResiduesPenicillinsinMilkbyEnzyme-linkedImmunosorbentAssayDB51/T659—2007四川省地方标准ICS：65.020.30备案号：1DB51/T659—2007目次前言II1范围32规范性引用文件33制样33.1样品的制备33.2样品的保存34测定方法3

2、4.1方法提要或原理34.2试剂和材料34.3仪器和设备44.4测定步骤44.5结果计算和表述45检测方法灵敏度、准确度、精密度55.1灵敏度55.2准确度55.3精密度5IDB51/T659—2007前言本标准按GB/T1.1—2000《标准的结构和编写规则》进行编制本标准由四川省畜牧食品局提出并归口本标准由四川省质量技术监督局批准本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所本标准主要起草人：杨松沛、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艳丽、王海波、吴晓岚IDB51/T659—2007牛奶中青霉

3、素残留检测方法－酶联免疫吸附测定(ELISA)法1　范围本标准规定了牛奶中青霉素残留量检测的制样和酶联免疫吸附测定法。本标准适用于牛奶中青霉素的残留量的快速筛选检测。对于可疑样品需用确证法确认。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1-2000标准化工作导

4、则第1部分：标准的结构和编写规则(ISO/IECDirectives,Part3,1997,RulesforthestructureanddraftingofInternationalStandards,NEQ)GB/T6682-1992分析实验室用水规则和试验方法农牧发[2003]1号兽药残留试验技术规范（试行）3　制样3.1　样品的制备取适量新鲜的空白或供试牛奶，涡旋混合使之均匀，密封。3.2　样品的保存-20℃以下冰箱中贮存备用。4　测定方法4.1　方法提要或原理牛奶中残留的青霉素用PB缓冲

5、液提取，酶联免疫吸附测定法测定,其基本原理是抗原抗体反应。酶标板的微孔包被有偶联抗原，标样或样品中的青霉素与酶标记抗原竞争青霉素特异性抗体。通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标记抗原。加入底物液，结合到板上的酶标记物将底物转化为有色产物。加入终止液，在450nm处测定吸光度值，吸光度值与试样中青霉素浓度呈反比。4.2　试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2.1　正己烷4.2.2　PB缓冲液的配制称取51.6gNa2HPO4.12H2O

6、和8.7gNaH2PO4.2H2O，用1000mL水溶解（pH=7.2）即可。4.2.3　青霉素试剂盒（采用官方备案的试剂盒）4.2.6.1青霉素系列标准溶液0mg/mL、0.1mg/mL、0.3mg/ml、0.9mg/mL、2.7mg/mL、8.1mg/mL4.2.6.2酶标板8条×12孔，包被有偶联抗原4.2.6.3酶标记物4.2.6.4青霉素抗体4.2.6.5底物溶液A4.2.6.6底物溶液B5DB51/T659—20074.2.6.7浓缩洗涤液临用前用水稀释二十倍作为洗涤液4.2.6.8终

7、止溶液1.1　仪器和设备1.1.1　酶标仪（配备450nm滤光片）1.1.2　天平感量0.01g1.1.3　分析天平感量0.00001g1.1.4　漩涡混合仪1.1.5　振荡器1.1.6　组织匀浆机1.1.7　冷冻离心机1.1.8　氮吹仪1.1.9　离心管20mL1.1.10　微量移液器单道20mL，50mL，100mL，1000mL；多道50～250mL1.2　测定步骤1.2.1　试料的制备试料的制备包括：——取混匀后的供试样品,作为供试试料。——取混匀后的空白样品,作为空白试料。——取混匀后空

8、白样品,添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。1.2.2　提取和净化精密量取1mL试料于离心管中，精密加入4mL0.1moL/LPB缓冲液(pH=7.2)，充分混合后加入5mL正己烷振荡提取10min，于8000r/min15℃离心10min,取出下层液体50mL用于分析。1.2.3　样品测定程序（20℃～26℃条件下操作）4.4.3.1使用前将试剂盒置于室温（20℃～26℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔