附件1食品中对位红的检测——高效液相色谱法（初步方案）.doc

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1、附件1:食品中对位红的检测——高效液相色谱法（初步方案）（北京出入境检验检疫局食品安全检测中心提供）1　应用范围本方法涉及以辣椒为主要或配料成分的食品和以番茄原料为基质的食品中违禁着色剂对位红的检测。2　定义对位红又称对硝基苯胺红，是一种工业用偶氮染料，不溶于水易溶于有机溶剂，不允许在食品中使用。3　方法要点对位红染料经乙腈超声提取后，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。以波长可变的紫外—可见检测器定性和定量。4　试剂与标准品除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，实验用水均为超纯水。试剂与标准品名称规格级别乙腈4L/瓶HPLC级

2、二氯甲烷4L/瓶HPLC级冰醋酸500ml/瓶分析纯对位红5　标准溶液5.1　标准贮备液称取200mg对位红（按产品标明的纯度折算成纯着成剂），用乙腈溶解并定容至100ml容量瓶。5.2标准工作液分别取上述标准贮备液50μl、100μl、200μl、500μl和1000μl溶液移入100ml容量瓶中以乙腈定容，此时溶液中对位红的浓度分别为01,02,04,10和20μg/ml。6仪器与设备7前处理仪器与设备分析仪器与设备万分之一天平电子天平打浆机25ml具塞比色管250ml烧杯100ml容量瓶配有紫外—可见检测器及自动进样器的反向

3、HPLC超声波震荡提取仪0．45μm滤膜CLOVERSIL—C18色谱柱4.6×250mm5μm5ml一次性注射器漩涡振荡器7　样品处理方法7.1　甜椒或红辣椒粉称取10g(准确至001g)样品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并摇匀。7.2　粉状调味品称取5g（准确至001g）样品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并摇匀。7.3　调味辣椒酱、原味辣椒酱、辣椒油等称取5g（准确至001g）样品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并摇匀。7.4　以番茄原料为基质的番茄酱和番茄沙司称取10g（准确至001g）样

4、品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并摇匀。7.5　提取将称量好的样品在超声波提取仪中充分超声提取60分钟，并不时摇匀。7.6　上样用5ml一次性注射器抽取一定体积的提取液，将提取液过045μm有机系滤膜至进样瓶中，拧紧瓶盖，在漩涡振荡器上振荡30秒，使溶液充分混匀，待测。8　色谱分析8.1　高效液相色谱测定8.1.1　流动相流动相A：10%乙酸溶液流动相B：乙腈8.1.2　梯度洗脱程序时间（Min）流动相A%流动相B%梯度曲线02080线性52080线性70100线性250100线性262080线性8.1.3　流速：10ml/

5、min8.1.4　进样量：20μl8.1.5　检测波长紫外—可见检测器或二极管阵列检测器，485nm检测。8.1.6　色谱柱CLOVERSIL—C18　色谱柱46×250mm5μm8.1.7　柱温：室温注：待基线稳定后开始进样，两次进样间隙时间为10分钟9　结果计算9.1　标准曲线用5点标准工作溶液的测定值绘制标准曲线，标准溶液浓度在01~20μg/ml范围内呈良好线性。（R＞0995）9.2　样品结果计算对位红含量按以下公式计算：R＝C×V×D/M　单位：mg/kgC—样品中待测组分的浓度，单位：μg/mlM—检测样品取样量（g）V

6、—样品溶液体积（ml）D—样品溶液的稀释倍数10　注意事项10.1　对位红与苏丹类染料化学结构和性质相类似，使用该色谱条件出峰时间约为5~6分钟。10.2　使用该方法可同时检测苏丹橙G、苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹红7B、胭脂树橙等。