正文描述:《微生物的量碳和酶活性地测定》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实用标准文案微生物量碳测定(此指标是反映土壤中微生物总量---群落大小的一个指标)称取经前处理相当于20-g烘干基的新鲜土样,盛装在50ml的烧杯中,放置于真空干燥器中,并放置盛有去乙醇的氯仿(约2/3烧杯)的50ml烧杯1只,烧杯内放入少量沸石(洗净烘干的瓷片,0.5mm大小),用真空泵抽空使氯仿沸腾5分钟,关闭真空干燥器阀门,在室温避光下熏蒸24小时。熏蒸24小时结束后,打开干燥器的阀门,取出盛装有氯仿的烧杯,然后用真空泵抽空3-4次(每次抽真空后应慢慢的打开阀门),使渗透到土样中的氯仿全部被排除。熏蒸结束后将土样转移到250ml的三角瓶中
2、,三角瓶中加入80ml0.5MK2SO4溶液震荡1小时,用中速定量滤纸过滤,并收集滤液。重复两次。过滤时添加空白2个。提取液应立即分析,或在-18℃下保存。在熏蒸的同时,称取另外两份鲜土样直接加入80ml0.5MK2SO4溶液震荡1小时,后过滤收集滤液。重复两次。过滤时添加空白2个。注意,低温(-18℃)下保存的土壤提取液,解冻后会出现一些白色沉淀,不必除去,但取样前应充分摇匀。提取液中的碳用总碳分析仪测定。(稀释20倍—吸取2.5ml到50ml容量瓶,上机。)试剂准备:氯仿;硫酸钾。标准曲线:00.5135微生物生物量碳(Bc)用下面公式计算
3、:Bc=Fc/Kc。式中Fc为熏蒸与不熏蒸土壤在培养期间CO2的释放量的差值,Kc为熏蒸杀死的微生物量中的碳在培养过程中被分解,并以CO2释放出来的比例,目前一般都采用0.45。(一般用K2Cr2O7氧化法测定有机碳,Kc为0.33~0.38;TOC分析仪测定,Kc一般为0.45)酶活性的测定包括脱氢酶(Dehydrogenase),脲酶(Urease),精氨酸水解酶,碱性磷酸酯酶,b-葡萄糖酶等。脲酶(Urease)和精氨酸水解蛋白酶(N-a-benzoyl-L-argininamide,BAA)活性的测定。两种测定所用的缓冲液均是0.1M磷
4、酸盐,pH为7。1M的尿素溶液和0.03M的BAA分别用作基质。2ml缓冲液和0.5ml基质溶液加入0.5g的土壤中,在30度(脲酶)或者39度(蛋白酶)下恒温培养90min。两种酶的活性均以水解反应中形成的NH4+量来衡量。b-葡萄糖苷酶(b-Glucosidase)的测定:参考文献:1.TabatabaiM.A.,1982.Soilenzymes.InMethodsofSoilAnalysis,Part2.ChemicalandMicrobiologicalProperties-AgronomyMonographNo.(secondEdit
5、ion),pp903-9472.HopkinsD.W.,SparrowA.D.,Shillam,L.L.,English,L.C.,Dennis,P.G.,Novis,精彩文档实用标准文案P.,etal.,2008.EnzymaticactivitiesandmicrobialcommunitiesinanAntarcticdryvalleysoil:ResponsestoCandNsupplementation.SBB.Doi:10.1016/j.soilbio.2008.03.022称取相当于烘干基1g新鲜土壤样品置于30ml试管(或50m
6、l的容量瓶)中,加入4mlpH6.5的缓冲液和1ml0.025M的对硝基苯基-b-D-葡萄糖苷(p-nitrophonyl-b-D-glucopyranoside,充分混合后塞上瓶塞在37度下培养1小时,然后加入1ml0.5MCaCl2和4mlpH为12的0.1Mtris-NaOH缓冲液,摇动悬液几秒钟。悬浊液立刻通过Whatman2滤纸过滤。最后在400nm测定(黄色溶液的)吸光值。(SBB2008,Trasar-Cepeda;SBB2008,Hopkins;Geoderma2005,Caravacaetal.)重复两次。每个土样做相应的对照
7、1个,并做无土对照两个。如果土样测定值超出标准曲线的范围,可进行适当的稀释。标准曲线的制作:将10ml标准对硝基酚标准溶液稀释到100ml的容量瓶中,充分混合均匀(此溶液的浓度为100mg/L)。然后吸取此稀释后的标准溶液0,1,2,3,4和5ml分别在50ml的容量瓶中,加水至50ml(浓度分别为0、2、4、6、8和10mg/L)。吸取此系列标准溶液各5ml于容器中,然后,在与土壤酶提取液同样条件下在400nm下测吸光度。(即在每个色阶溶液中分别加入1ml0.5MCaCl2和4mlpH为12的0.1Mtris-NaOH缓冲液,然后过滤,最后测
8、定吸光值)。此标准曲线应现配现测。试剂配制:1.pH6.5的缓冲液保存液的配制:三羟甲基氨基甲烷[Tris(hydroxymethyl)aminome
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