姜黄素与其代谢产物的体内药动学及对p-糖蛋白功能和表达的影响-药剂学专业毕业论文

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1、优秀毕业论文硕士学位论文中文摘要姜黄素与其代谢产物的体内药动学及对P．糖蛋白功能和表达的影响摘要一、目的采用血浆药理学与现代分析技术相结合的方法，研究姜黄素与其代谢产物四氢姜黄素的体内药动学及对Caeo．2细胞上P．糖蛋白功能和表达的影响，研究其逆转肿瘤耐药及药物相互作用的依据。二、方法(一)姜黄素单剂量药动学研究方法1．给药方法采用随机开放试验设计，12名健康志愿受试者单剂量口服姜黄素胶囊4粒(200mg)。2．生物样本采集方法分别于服药前及服药后0，O．25，O．5，1，1．5，2，3，4，6，8，12，24和36h由肘静脉取血5mL置肝素化离心管中，分离

2、出血浆，置．800C冰箱中保存待测。3．测定方法采用HPLC．ESI．MS／MS法测定血浆中姜黄素及其代谢产物四氢T精品参考文献资料优秀毕业论文硕士学位论文中文摘要姜黄素的浓度。(二)姜黄素、四氢姜黄素对P．糖蛋白的作用研究方法1．细胞培养以及形态学验证培养Caco．2细胞、脐静脉内皮细胞(ECV304)，用于研究姜黄素和四氢姜黄素对P．糖蛋白功能和表达的影响。Caco．2细胞和ECV304细胞均采用DMEM高糖培养基进行常规培养；细胞荧光免疫法进行细胞膜上P．糖蛋白表达验证。2．细胞毒性试验采用苯基溴化四氮唑蓝法(MTT)，确定姜黄素和四氢姜黄素的体外最大非

3、细胞毒性剂量，保证试验过程中细胞的活性，并为姜黄素、四氢姜黄素对P．糖蛋白功能和表达的作用研究提供与细胞作用的最大浓度。3．姜黄素、四氢姜黄素和含药血浆对P．糖蛋白功能的影响以ECV304细胞作阴性对照细胞，环孢素A作为P．糖蛋白功能抑制的阳性对照，使用流式细胞术分析姜黄素、四氢姜黄素及含药血浆对P．糖蛋白底物一罗丹明．123(Rh．123)在Caco．2细胞中外排的影响，以此反应P．糖蛋白功能的变化。4．从蛋白质水平研究姜黄素、四氢姜黄素对P．糖蛋白表达的影响环孢素A作为P．糖蛋白表达上调的阳性对照，不加药处理的Caco．2细胞作为阴性对照，采用流式细胞术分

4、析姜黄素、四氢姜黄素Ⅱ精品参考文献资料优秀毕业论文硕士学位论文中文摘要对Caco-2细胞上P．糖蛋白表达的影响。5．从mRNA水平研究姜黄素、四氢姜黄素对MDRlmRNA表达的影响环孢素A作为MDRl基因mRNA上调的阳性对照，不加药处理的Caco．2细胞作为阴性对照，采用RT-PCR技术分析姜黄素、四氢姜黄素对Caeo-2细胞MDRl基因mRNA水平表达的影响。三、结果(一)姜黄素单剂量药动学研究结果1．姜黄素及四氢姜黄素的测定姜黄素和四氢姜黄素分别在0．50～37．50ng‘mL以和1．67～100．00ng．mL"1浓度范围内线性关系良好，最低检测浓度分

5、别为O．125ng·mL‘1和0．500ng·mL～。萃取回收率均大于71．46％，方法回收率为94．30％～104．43％，日内、目问RSD均小于11．92％，高、中、低三种浓度的质控样品稳定性良好，浓度变异均小于15．00％。2．姜黄素和四氢姜黄素的药动学参数12名健康志愿者单剂量口服姜黄素后，姜黄素和四氢姜黄素的各项药动学参数如下：t一为2．42士1．93h和2．54士2．03h，tl／2为10．67+2．43h和12．66士3．63h，Cm瓤为11．38士4．90ng。mL。1和37．10圭21．98ng·mL"1，AUCo．36为128．13j：49

6、．07ng‘h‘mL’1和309．76a：123．93ng·h·mL～，AUC帅为138．83+48．21ng。h‘mL。1和m精品参考文献资料优秀毕业论文硕士学位论文中文摘要343．65+117．39ng·h·mL～，CL／F为386．69士88．02mL·h．1和158．27+42．37mL·h-1，Ⅵ为6080．38+2080．80mL和3063．96+1480．17mL。(二)姜黄素、四氢姜黄素对P．糖蛋白作用的研究结果1．细胞培养以及形态学验证Caco．2和ECV304细胞形态正常；Caco．2细胞高表达P．糖蛋白，可用于研究姜黄素和四氢姜黄素对P．

7、糖蛋白功能和表达的影响；ECV304细胞基本不表达P．糖蛋白，适合作为阴性对照细胞。2．细胞毒性试验姜黄素和四氢姜黄素分别在小于等于1．01xrnol·L4和5．09mol·Ld时，与Caco．2细胞培养72小时后，细胞的存活率大于90％。因此，选取姜黄素和四氢姜黄素的最大浓度分别为1．01xrnol·L’1和5．09mol·L一，进行其对Caco．2细胞上P．糖蛋白功能和表达影响的研究。3．姜黄素、四氢姜黄素和含药血浆对P．糖蛋白功能的影响低、中、高浓度(O．1、O．5、1．01amol·L以)的姜黄素减少了罗丹明．123在Caco．2细胞内的蓄积(p

8、05)；低、中、高浓度(O．5、1．0