血球与溶血因素对elisa检测的干扰与洗板的消除作用

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1、血球与溶血因素对ELISA检测的干扰与洗板的消除作用钟有光劳希盘珍梅（广丙梧州市疾病预防控制中心543002）【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-50S5（2010）27-0172-03【摘要】目的探讨血清样品混杂血球或溶血对酶联免疫吸附试验（EUSA）检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的干扰影响及消除措施。方法使用两种试剂盒设置不同的洗板程序，以HBsAg阴性血清作稀释模拟制备的含不同浓度血球的溶血与不溶血标木做实验。结果上海某试剂盒在RBC含量0.36×1012/L〜7.22×1012八（无溶血）系

2、列检样中洗板6次（试盒设置）者所测8个检样全部出现假阳性，吸光值A在0.214〜3.288间；增加洗板至12次则假阳性全部消除。北京某试剂盒洗板5次（试盒设置）在RBC含量0.37×1012/L〜7.34×1012/L（无溶血）、HGB含量19g/L〜232g八（溶血）两系列检样中未出现阳性；当洗板10次时，含血球无溶血标木洗10次A值明显低于洗5次者（p<0.01）。结论血球或溶血标木对EUSA检测HBsAg有干扰并可能导致假阳性，适当增加洗板次数可消除干扰影响。【关键词】EUSA—步法HBsAg检测血球因素溶血因素EUSA干扰

3、与消除ELISA—步法检测乙肝病毒（HBV）标志物检测A灵敏度高，特异性强等优点而被广泛应用。但在质量监督中、尤其在一些基层实验室发现，由于血球或溶血因素对检测的干扰影响导致出现假阳性并不少见。对其影响及消除我们作了实验研究并予实践，报告如下。1材料与方法1.1实验研究标木来源与质监检查木单位健康体检（静脉血）检测后剩余标木，实验室日常检测工作中质量监督检查。1.2实验标木制备试验前取已知HBsAg阴性标木15份小心收集其血清于一试管混合摇匀为原倍血清；收集血球（无菌剔除纤维蛋白原，无凝集）轻摇匀，经普通离心1500转6min,吸弃上清液剩下为原倍血球。

4、采取逐级稀释法，以原倍血清配制原倍血球成血球含量为80%、60%、50%、40%、20%、10%、5%7管不同浓度的血清血球混合物，并与原倍血球管于日本光电MEK-6318K血球仪测红血球（RBC）、血红蛋白（HGB）含量。1.2.1试验标本上述系列不同血球浓度管及原倍管摇匀后一分为二成2份，•其中1份置冰箱冷冻室15min,再置37°Cl0min使血球完全溶解（溶血），另1份不作处理（无溶血），2份标本与原倍血清同吋作检测。1.3试剂上海某生物技术冇限公司生产，批号：20050801；北京某生物药业股份有限公司，批号：20070802o均为效期内使用。

5、1.4仪器洗板机：ELX50型；酶标仪：安图2010型。1.5检测方法EUSA双抗体夹心一步法，严格按试剂盒说明进行。检测波长450nm，用空白孔凋零测定各孔吸光值（A）。结果判断根据试剂盒说明书判断标准，阴性、阳性的实验结果符合试剂盒要求。2试验与结果2.1含血球、溶血标本对检测的非特异性影响及洗板环节的消除作用2.1.1上海某试剂盒对含血球标本的检测试验制备系列含不冋浓度血球标本，设置洗板6次（试剂盒程序，全程6min）、12次（6次2遍）两种洗板程序作检测观察。结果洗板6次者所检8管均出现阳性反应；当洗板程序选12次吋，则全部变为阴性，并有37.5

6、%（3/8）的样管为负值；而原倍血清洗板6次、12次A值都在较低水平。试验未见A值高低与RBC含量成比例联系及增加洗涤对阳性血清A值有影响。见表1。注：临界值0^0什=阴性对照孔A均值×2.1（阴性对照孔低于0.05者按0.05计算），≥0.105为阳性；*最后一次灌注洗液后肉眼可见孔中液体呈少许淡红色；**试剂盒要求洗涤程序。2.1.2北京某试剂盒对含血球、溶血标本的检测试验设置洗板5次（试剂盒程序，全程5min）、10次（5次2遍）、3次（全程3min）3块检测板，每板同吋加无溶血、溶血两系列标本进行配对检测。结果洗板3次者，原倍血

7、球的不溶血（RBC7.34×1012/L）、溶血（HGB232g/l）样管均出现假阳性，且A值在较高水平；洗板5次者两系列均未出现阳性反应，且A值在较低水平；当洗板为10次吋两系列均有75%（6/8）的样管A值出现负值。两系列各自配对，含血球不溶血标本洗10次A值明显低于洗5次者（t=4.840,p<0.01）,溶血标本之间则无统计学差别（t=2.008,p>0.05）；同一洗板次数间配对检测，A值结果无统计学差别（t在0.356〜1.187之间，p<0.01）；原倍血清洗板3次、5次、10次，A值都在较低水平，增加洗板次数对阳性血清A值未见

8、冇影响。见表2。注：临界值cutoff=阴性对照孔A均值×2.1（阴