dx对氧化应激状态下人视网膜色素上皮细胞的保护作用及机制的初步研究

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1、博士学位论文(专业学位)ProtectinDX对氧化应激状态下人视网膜色素上皮细胞的保护作用及机制的初步研究所院：北京协和医院姓名：戴呋宁指导教师：董方田教授导师小组：董方田教授、戴荣平副教授、于伟泓副教授学科专业：眼科学研究方向：眼底病完成日期：2015年4月22日万方数据ProtectinDXinhibitstheproductionofbothinflammatorycytokinesandreactiveoxygenspeciesinRPEcellsByYiningDaiADissertationSubmittedtoPe

2、kingUnionMedicalCollegeinConformitywiththeRequirementsfortheDegreeofDoctorofOphthalmologyMajor：Ophthalmology(OcularFundusDiseases)UndertheSupervisionofProfessorFangtianDongBeijing，ChinaApm2015万方数据北京协和医学院博士研究生学位论文目录中文摘要5英文摘要7中文摘要5Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．7第一部分RPE体外氧化应激

3、细胞模型的建立．121．1前言121．2材料与方法121．2．1主要仪器设备121．2．2主要实验试剂131．2．3实验细胞141．2．4实验方法141．3结果201．3．1正常及氧化应激下ARPE-19细胞的形态观察201．3．2氧化应激对ARPE-19细胞活力的影响201．3．3氧化应激对ARPE-19细胞分泌VEGF—A的影响一221．3．4氧化应激时ARPE-19细胞内ROS的变化．241．4讨论．．251．4．1RPE细胞的选择．251．4．2RPE细胞氧化应激模型的建立．261．5小结．．271．6参考文献．．28第二

4、部分PDX对氧化应激状态下人视网膜色素上皮细胞的保护作用及机制研究．．312．1前言312．2材料与方法322．2．1主要仪器设备322．2．2主要实验试剂332．2．3实验方法352．3结果．．422．3．1PDX抑制t-BH引起的细胞内ROS增加。422．3．2PDX增强氧化应激时细胞SOD活力及T-AOC．442．3．3PDX降低氧化应激诱导的TNF．c【和VEGF—A分泌462．3．4PDX对氧化应激时TNF一0【和VEGF—A表达的影响492．3．5PDX上调氧化应激时PGC—la转录及蛋白表达502．4讨{仑．．522

5、．5小结与展望552．6参考文献56第三部分03．3长链多不饱和脂肪酸及其衍生物在AMD防治中的研究进展．．623．1概述．．633．203—3LCPUFAs的结构、来源及药理功能63万方数据北京协和医学院博士研究生学位论文3．3(o一3LCPUFs在AMD防治中的研究643．3．1实验室研究643．3．2临床研究643．3．3潜在的不利因素663．403—3LCPUFAs衍生物概述663．5(o一3LCPUFAs衍生物与AMD相关实验室研究673．6小结．．673．7参考文献68缩略词表一74己发表文章一75会议摘要．．75个人

6、情况一76致谢．77独创性声明一784万方数据北京协和医学院博士研究生学位论文中文摘要目的：二十六碳烯酸(Docosahexaenoicacid，DHA)高度富集于视网膜色素上皮(Retinalpigmentepithelium，RPE)细胞，经脂氧合酶代谢可被转化为protectinDX(PDX)。本研究目的为确定DHA衍生物PDX是否对氧化应激状态下ARPE-19细胞产生保护作用及其机制，为脂类及其衍生物在年龄相关性黄斑变性防治研究方面提供实验室证据。方法：取生长良好的ARPE-19(第16—18代)细胞，以完全DMEM／F1

7、2培养基均匀接种于96孔板(2X104／0．1ml／：G)或六孔板(4×105／2．0ml／孔)，每日于倒置显微镜下观察。当细胞生长至接近80％融合时，以无血清DMEM／F12培养基液饥饿细胞24小时。在200州叔丁基过氧化氢(tert—buWthydroperoxide，t-BH)处理2h对细胞进行氧化应激诱导前，分别以0．05州、0．5州、1州、5叫或10州PDX预孵育ARPE-19细胞20rrm。氧化应激诱导结束后，以无血清DMEM／F12培养基液清洗细胞3次，去除多余t-BH。然后以含1％FBS的DMEM／F12培养基液继

8、续处理细胞，按实验不同检测时间点收集细胞或细胞上清样本。其中：1)以含1％FBS的DMEM／F12培养基液处理细胞2小时，收集六孑L板中的细胞用于实时荧光定量PCR检测；2)以含1％FBS的DMEM／F12培养基液处理细胞4小时，收集六孔板中细胞用