时间分辨免疫荧光分析法检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度及其影响因素分析

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1、时间分辨免疫荧光分析法检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度及其影响因素分析(核工业四一七医院检验科陕西西安710600)【摘要】目的：探讨时间分辨免疫荧光分析法检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度及其影响因素。方法：选择60例收治的乙肝患者作为实验组，60例非乙肝患者作为对照组，分别对两组患者用荧光免疫分析法(TRFIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、乳胶法对乙型肝炎表面抗原进行检测，并在高、屮、低三浓度屮各取20例标本用时间分辨荧光分析法复检，对比结果。结果：TRFIA检测的灵皱度、特异性明显高于ELISA、乳胶法所

2、引起的假阳性、假阴性明显低于ELISA、乳胶法(P<0.05)；TRFIA方法检测低浓度血清HBsAg的灵敏度明显低于屮、高浓度血清HBsAg的灵敬度，且差异有统计学意义(PV0.05)。结论：时间分辨荧光分析法检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度较高，但会受到低浓度血清HBsAg的影响，为了提高临床检测水平，当遇到比较低浓度的血清HBsAg样本时，要对样本再次检测，以保障检测结果的正确性。【关键词】时间分辨荧光分析法；乙型肝炎表面抗原；灵敏度；影响因素【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1007-

3、8231(2016)11-0061-02时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)是比较先进的非放射性免疫分析技术，其灵敏度在目前也是首屈一指的，较放射免疫分析(RIA)高出3个数量级。由于采用了稳定的稀土元素标记和增强液的放大效应，最大限度地提高了检测地灵敏度，在特异性和稳定性及测量自动化方面显示其优越性，大大地提升了其工作的灵敏度，在临床上得到了广泛的应用。乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的，我国表面抗原(HBsAg)发生率较高，约为16%o感染后表面抗原会大量存积，从而形成了表面抗原血症⑴。表面抗原

4、只是病毒外壳，不具有传染性，但它是是否感染乙肝病毒的早期诊断1•资料与方法1.1资料选择我院自2014年7月〜2015年2月期间收治的60例乙肝患者（实验组）的血清进行分析，其中男36例，女24例，年龄26〜72岁，平均年龄43.2岁；对照组为同期在我院检测的60例非乙型肝炎患者，其中男37例，女23例，年龄25〜73岁，平均年龄42.6岁。两组患者一般资料相比较，无统计学意义（P>0.05）,具有可比性。1.2试剂与仪器时间分辨免疫荧光分析法检测试剂为HBsAg定量检测试剂盒、仪器（新波生物生产的EFF

5、ICUTA全自动样本前处理系统）制作标准曲线必须要根据试剂盒内提供的不同浓度的标准品，此时也要检测样本血清HBsAg,并将测得的结果及吋准确的记录下来。酶联免疫吸附法（ELISA）检测试剂为上海荣盛生物有限公司，乳胶法为艾博生物医药有限公司。1.3方法将采集分离得到的标本血清分别用TRFIA法、ELISA法、乳胶法进行检测,结果分为阴性和阳性。操作严格按照试剂盒说明书。所有样本检测完毕后，将三种方法测得的HBsAg定量结果分为三种，高浓度（>215ng/ml）、中浓度（5〜215ng/ml）.低浓度（V5

6、n"ml）,并在高、中、低三个浓度，随机各取20份再用TRFIA法进行检测。1.4灵敏度与特异性计算方法灵敏度二实验组实际检出阳性数/理论检出阴性数；特异性二对照组实际检出阴性数/全部受检的未患病者总数；假阴性率"■灵敏度；假阳性率"■特异性。2•结果2.1三种方法检测结果TRFIA、ELISA、乳胶法三种方法灵敏度分别为96.67%、91.67%、85.00%,特异性分别为98.33%、95.00%、91.67%,TRFIA的检测方法的灵敏度、特异性明显高于ELISA、乳胶法，所引起的假阳性、假阴性明显

7、低于ELISA、乳胶法，且差异有统计学意义(P<0.05)o见表1、2o表1三种方法检测乙型肝炎表面抗原结果(n)1.讨论检测方法灵敏度的高低决定了其检测结果的准确性，较低的灵敏度特别是对初期乙型肝炎感染患者血浆中较低HBsAg的浓度存在误差,从而导致检测结果判定失误，造成误诊。对患者来说会错过最佳的治疗期，加重病情，影响预后［2］。有研究证明，TRFIA法是近年发展起来的一・种非放射标记超微量免疫检测技术，该方法采用了电光学发光技术和磁性微珠包被等技术“以稀土离子为标记物,无放射性污染，通过时间延迟，去

8、除非特异性荧光干扰，并且是全自动检测仪,避免人为误差［3］。TRFIA方法特异性强，排除非特异性荧光的干扰；灵敏度高,对较低浓度的HBsAg也能准确的检测出来；标准曲线范围宽，可得到最直接的数据变化。与ELISA、乳胶法相比，TRFIA检测方法能够简单、快速、准确可靠地检测出患者体内病毒标志物的含量，使结果更加直观［4］。本次研究结果证明，TRFIA的检测方法的灵敏度、特异性明显高于ELISA、乳胶法，所引起的假阳性、假阴性明