骨髓间充质干细胞对A549肺腺癌细胞损伤修复作用的分析

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1、山西医科大学硕士学位论文骨髓间充质干细胞对A549肺腺癌细胞损伤修复作用的研究摘要目的：研究人骨髓间充质干细胞（hMSC）与A-549肺腺癌细胞相互作用对顺铂损伤后癌细胞的增殖及凋亡的影响，通过检测成纤维细胞活化蛋白（FAP）、成纤维细胞特异蛋白（FSP）、血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β（TGF-β）等因子的表达观察骨髓间充质干细胞同A-549细胞共培养后的变化，并探讨其对肿瘤细胞损伤修复作用的机制。方法：取传代培养的A-549细胞和hMSC细胞，分别制备A-549条件培养基（A-549-CM）及h

2、MSC条件培养基（MSC-CM）。hMSC用A-549-CM培养2日、两种细胞混合培养2日，分别检测上清液中VEGF、TGF-β因子的表达。hMSC用A-549-CM培养16日，观察hMSC形态变化并使用免疫组织化学的方法检测FAP、FSP等成纤维细胞标志物的表达。应用噻磋蓝（MTT）法检测hMSC对A-549细胞给药损伤后增殖的影响。结果：ELIZA结果显示，A-549-CM培养MSC、以及两细胞混合培养，所分泌VEGF及TGF-β均高于正常培养组。免疫组织化学结果显示，A-549-CM培养MSCs16日后检测

3、细胞表面FAP、FSP均称阳性表达。MTT法检测结果显示MSC-CM可明显促进A-549细胞增殖，加药MSC-CM组A-549细胞增殖率高于加药普通培养基组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：MSCs与A-549细胞相互作用可以明显促进两者VEGF及TGF-β的分泌，MSCs经A-549-CM长期培养后向成纤维细胞方向分化，MSCs可以减轻顺铂对A-549细胞的影响，可能与肿瘤的损伤后修复有关。关键词：肺癌；MSCs；A-549；TGF-β；VEGF；FAP；FSPI山西医科大学硕士学位论文Stutyont

4、herepaireffectofMSCstotheinjuryofA-549humanlungadenocarcinomacellsAbstractObjective:TostudyhMSCimpactonthemigrationandproliferationofA-549cellswhichhasbeenconditionedbyDDPanditsmechanism.ToobservethetransitionofMSCsbydetectingtheexpressionofvascularendothelia

5、lgrowthfactor(VEGF),transforminggrowthfactor-β(TGF-β),fibroblastspecificprotein(FSP)andfibroblastactivationprotein(FAP),thendiscussthemechanismofMSCtorepairtheinjuryoftumor.Methods:hMSCandA-549cellsinmitoticphasewereusedtomakehMSCconditionedmedium(MSC-CM)andA

6、-549conditionedmedium(A-549-CM)．hMSCswereconditionedfor2daysinA-549-CM,thenTGF-β1andVEGFsecretionwasmeasuredbyenzymeslinkedimmunosorbantassay(ELIZA).ThelongtermconditionedMSCwereconditionedwithA-549-CMfor16days.Cellswerethenanalyzedbyimmunocytochemistryforthe

7、presenceofFAPandFSPexpression.MTTmethodwereusedtodetecttheroleofMSC-CMplayinginthemigrationandproliferationofA-549cells.Results:ELIZAshowedthatafter2daysconditioningbyA-549-CM，MSCshavemoresecretionofVEGFandTGF-βthancontrolscells.ImmunohistochemicalS-Pmethodsh

8、owedthatafteralongtermconditioning,FAPandFSPweredetectedonMSCsforsure.MTTshowedthatMSC-CMhadevidentlyeffectsontheproliferationofA-549cells.A-549cellswhichwasconditionedbyMSC-CMwithDDPhada