大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺研究

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1、大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺研究赵大洲，邱鹰昆，陈继永，刘淑梅，姜永涛【关键词】蟾皮二烯内酯；,,大孔树脂；,,工艺　　摘要：目的建立大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺。方法蟾皮醇提液减压回收醇，经石油醚脱脂，水层上DM130大孔树脂，不同浓度乙醇梯度洗脱，TLC显色结合HPLC法检测二烯内酯所在洗脱部位，比色法测定总二烯内酯含量。结果蟾皮中二烯内酯集中在70%乙醇洗脱部分；采用本实验确定的工艺，制得蟾皮总二烯内酯含量为53.90%，收率为0.23%。结论该工艺可以较好地富集蟾皮总二烯内酯。　　关键词：蟾皮二烯内酯；大孔树脂；工艺　　StudyonEnrichingTotalBu

2、fadienolidesfromtheSkinofToadbyMacoroporousResin　　Abstract：ObjectiveToestablishprocessingmethodforenrichingtotalbufadienolidesfromtheskinoftoadbymacoroporousresin.MethodsThealcoholextractionoftheskinoftoadetherphasesaftereliminatingalcohol.ThenthenofDM130macoroporousresin,andelutedgraduallybya

3、lcohol.ThetotalbufadienolidesinedbyUV,telocinobufaginasreferencesubstance,at299nm.ResultsThetotalbufadienolidestheskinoftoad.　　KeyelanostictusSchneider的干燥表皮，临床用于治疗多种癌症、小儿疳积、局限性硬皮病及小儿腮腺炎等。现代药理研究表明，二烯内酯为其主要活性成分，具有抗肿瘤、抗病原微生物及强心等作用〔1~4〕，其分离工艺未见报道。本实验旨在找到一种利用大孔树脂分离蟾皮总二烯内酯的工艺条件。　　1仪器与材料　　130购于山东鲁抗医药

4、股份有限公司。　　2方法　　2.1分析方法制得远华蟾毒精对照品和蟾皮总二烯内酯的甲醇溶液，在200~400nm之间紫外扫描，测得最大吸收峰分别为299.40nm和294.60nm，确定HPLC法及比色法检测波长为299nm。光谱图见图1。　　2.1.1远华蟾毒精测定方法（HPLC）×4.6mm；5μm）；检测波长：299nm；流动相为乙腈水（40∶60）。　　2.1.2蟾皮总二烯内酯含量测定方法（比色法）按分光光度法，在299nm测定远华蟾毒精对照品不同浓度溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为：y=0.0131x，相关系数：r=1。结果表明，

5、远华蟾毒精对照品在4~100μg/ml线性关系良好。样品溶液在299nm测定吸光度，按比色法计算出蟾皮总二烯内酯的含量。　　2.2大孔树脂上样液的制备称取蟾皮药材150g，剪碎，加入95%乙醇回流提取两次，1500ml/次，合并两次提取液，减压回收乙醇后，加入石油醚萃取两次，水层约150ml，即得。　　图1远华蟾毒精及蟾皮总二烯内酯紫外吸收光谱图（略）　　2.3总二烯内酯洗脱剂的选择分别以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇各1000ml洗脱大孔树脂柱（Φ40mm,V=400ml），每1000ml接收1份，以HPLC法定性检测远华蟾毒精。TLC定性检测各馏分中的二烯内

6、酯〔5〕：①硅胶G薄层板，丙酮氯仿环己烷（3∶3∶4）为展开剂，10％硫酸显色；②硅胶G薄层板，氯仿甲醇（9∶1）为展开剂，20％三氯化锑氯仿溶液显色。　　2.4总二烯内酯样品的制备及检验称取蟾皮药材1.6kg，制得上样液，上大孔树脂柱（Φ=8.5cm,V=2200ml），先用50%乙醇洗脱除去杂质，再用70%乙醇洗脱，70%洗脱液减压干燥，得蟾皮总二烯内酯，测定含量，计算收率。　　3结果与讨论　　HPLC法检测各洗脱液，仅70%乙醇洗脱液中检出远华蟾毒精，与对照品对照，保留时间为10.30min；同时对比各洗脱液液相图谱，可以看出，水、30%乙醇和50%乙醇洗脱液成分各峰保留时间

7、均小于5min，而石油醚萃取成分及95%洗脱成分，在此条件下均无明显吸收峰，只有70%乙醇洗脱液在5~15min之间，出现一系列的吸收峰，且TLC显色仅70％乙醇洗脱液呈现阳性，推测液相色谱中，5min以前出的峰主要为糖、氨基酸和色胺生物碱等极性较大的成分，蟾皮二烯内酯成分集中在70%洗脱液中，由此确定大孔树脂的洗脱工艺为：50%乙醇洗脱除去杂质，再用70%乙醇洗脱。按本法制得样品总二烯内酯含量为53.90%，计算得收率为0.23%。石油醚萃取液及各洗脱液的液相色谱图