熊胆冻干粉针剂对缺氧

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1、熊胆冻干粉针剂对缺氧作者：金光显，任香善，林贞花，宋京郁，玄延花，金贤国【关键词】熊胆；,,血管内皮；,,丙二醛；,,一氧化氮　　摘要：目的探讨熊胆冻干粉针剂对缺氧-再复氧损伤的血管内皮细胞的保护作用及抗动脉粥样硬化机制。方法采用脐静脉血管内皮细胞（humanumbilicalvEinendothelialcell，HUVEC）体外原代培养方法。通过倒置相差显微镜观察和比较，各组内皮细胞形态，用MTT法检测吸光度值，利用比色法测定细胞上清夜中的丙二醛（malondialdehyde，MDA）和一氧化氮（nitricoxide，NO）含量。结果MTT法结果显示：正常组、

2、熊胆组与缺氧－再复氧组比较有显著差异（P<0.01）。缺氧-再复氧组的MDA含量增高，而NO含量降低，正常组和熊胆组中检测结果相反。结论熊胆冻干粉针剂对缺氧－再复氧损伤的血管内皮细胞有保护作用。　　关键词：熊胆；血管内皮；丙二醛；一氧化氮　　ProtectiveEffectsoftheLyophiledPoechanismsofanti-atherosclerosis.MethodsByusingprimarycultureofhumanumbilicalvEInendothelialcells(HUVEC)invitro,theVECsorphological

3、changesofVECbytheinvertedmicroscope,theopticaldensity(OD)valueofcellsetricmethod,contentofMDAandNOinthesupernatantfluidofculturedcellsetry.ResultsTheMTTassayshoalgroup,bearbilegroupandhypoxia-reoxygenationgroup.TheMDAcontentincreasedandNOcontentdecreasedinthehypoxia-reoxygenationgroup,i

4、ncontrast,MDAcontentdecreasedandNOcontentincreasedinthenormalandbearbilegroups.ConclusionTheresultsindicatethatthelyophiledpoanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC），以酶消化法取得。　　1.1.2试剂与主要仪器熊胆冻干粉针剂由延边大学药学院提供。人第八因子相关抗原（Ⅷ因子）是美国Santacruz产品，一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）检测试剂盒购置于南京建成生物有限公司。M199培养基为美国GIBCO公司产品

5、；胎牛血清为美国HYCOLONE公司产品；连二亚硫酸钠为沈阳市东兴试剂；MTT为SIGMA公司产品。倒置相差显微镜，日本OLYMPUS产品，37度CO2培养箱是德国SL产品。　　1.2方法　　1.2.1脐静脉内皮细胞的分离及培养按Jaffe等［1，2］的方法略加修改进行。在无菌条件下，取健康产妇分娩后6h以内的脐带，灌注0.1%Ⅰ型胶原酶（collagenaseⅠ）10～15ml，置37℃水浴中孵育15～20min。收集含有细胞的酶液，放入离心管中,1000r/min离心10min,沉淀中加入含有20％FBS，50U/ml肝素、终浓度为2mg/ml的L谷氨酰胺的完全M

6、199培养液5ml，充分混合制成细胞悬液，以（1.5~2.0）×104/cm2密度植入培养瓶中，置37℃，5％的CO2培养箱中培养，待细胞长成融合状态后进行鉴定。　　1.2.2分组及药物处理实验随机分为3个组：分别为缺氧-再复氧组，正常组和熊胆组。熊胆组的熊胆终浓度分别为60，80，120μg/ml和160μg/ml。细胞缺氧－再复氧损伤造模法：根据　　2结果　　2.1内皮细胞形态学观察在倒置相差显微镜下观察，正常组EC生长旺盛，呈上皮样贴壁生长，细胞呈多角形或长梭形，呈鹅卵石样铺满底层。缺氧-再复氧组EC缺氧2h后，细胞间隙增大，胞体变小，细胞收缩变圆，胞浆透明，少

7、数细胞悬浮脱落；随着作用时间进一步延长，胞膜边缘不清楚，部分胞膜不完整，细胞出现空泡和颗粒变性，细胞脱落增多，到将近4h的时候出现拉网现象，而熊胆组的EC形态与正常组基本相似。结果见图1~3。.L.编辑。　　图1正常组细胞×10（略）　　图2缺氧再复氧组细胞×10（略）　　图3熊胆组细胞×10（略）　　2.2各组细胞培养液中OD值、MDA、NO含量的检测结果结果见表1。正常组、熊胆组与缺氧再复氧组比较，OD值均有显著差异（P<0.01）。缺氧-再复氧组的MDA含量增高，而NO含量降低；相反，正常组和熊胆组中MDA含量减少，而NO含量增高；缺氧再