去辣椒素敏感性窦房结传入神经的大鼠模型的建立论文

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1、去辣椒素敏感性窦房结传入神经的大鼠模型的建立论文张艳辉，马爱群，席雨涛【关键词】窦房结；,传入神经；,辣椒素；,模型Modelingofcapsaicinsensitivesinoatrialnodedeafferentedrat【Abstract】AIM:Toinvestigatetheodels.METHODS:Highconcentrationofcapsaicinonths,itters［substanceP(SP)andcalcitoningenerelatedpeptide(CGRP)］inthesinoatrialnodeareathroughimmunofluorescen

2、tstainingandlaserconfocalmicroscopy.RESULTS:Atplannedtimepointsafterthedeafferentationoperationandtheshamoperation,immunohistochemistryshooperatedrats,ethod.【Keyodel【摘要】目的：探讨建立去除大鼠辣椒素敏感性窦房结传入神经模型的方法.方法：在大鼠上腔静脉周围应用高浓度的辣椒素建立去辣椒素敏感性窦房结传入神经模型，通过免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜检测传入神经递质P物质（SP）和降钙素基因相关肽（CGRP）的变化.结果：经辣椒素处

3、理后在不同的观察时间，激光共聚焦显微镜观察显示窦房结区域CGRP和SP阳性神经纤维消失，而假手术组大鼠则清楚地呈现CGRP和SP的阳性神经纤维.结论：应用高浓度的辣椒素于大鼠上腔静脉根部周围可以建立去辣椒素敏感性窦房结传入神经大鼠模型.该模型指标稳定，造模方法可重复性强.【关键词】窦房结；传入神经；辣椒素；模型0引言近年来，一些研究者发现传入神经参与了冠心病的发病过程和心脏缺血预适应的调节机制［1］.而有关窦房结传入神经作用的文献报道较少.建立去神经模型是研究神经生理病理的一种重要途径.Dainius等［2］通过一系列的研究认为位于上腔静脉根部周围的神经节经由心脏表面神经丛与窦房结相联系.

4、高浓度的辣椒素是一种高度选择性的传入神经毒素［3］.我们通过在大鼠窦房结神经心外膜走行部位应用高浓度辣椒素建立去辣椒素敏感性窦房结传入神经模型.旨在为进一步的揭示窦房结病理情况下传入神经的重要作用和病态窦房结综合征的病因与发病机制奠定基础.1材料和方法1.1材料清洁级健康雄性SD大鼠60只.freela公司)；TAb浓度为1∶200（以色列AlomoneLabs公司）；SP兔抗大鼠mAb为1∶6000（美国Chemicon公司）；降钙素基因相关肽（calcitoningenerelatedpeptide，CGRP）小鼠抗大鼠mAb浓度为1∶8000（美国Sigma公司）；荧光二抗(中国华美

5、生物工程公司)：山羊抗兔IgGFITC浓度为1∶100；山羊抗兔IgGTRITC浓度为1∶200；山羊抗小鼠浓度IgGFITC浓度为1∶100；其他试剂均为国产分析纯.HX200动物呼吸机（成都泰盟生物技术有限公司）；202B型电热恒温干燥箱吸引器（北京科伟永鑫实验仪器设备厂）；AG135精密电子天平（瑞士MettlerToledo公司）；HM500O型冰冻箱切片机（德国Zeiss公司）；激光共聚焦显微镜（德国Leica公司）.1.2方法1.2.1模型的建立将60只大鼠随机分为去神经组和假手术组，每组30只.再根据观察时间各组又随机分为3d组，2L/kg）腹腔注射麻醉.以自制的大鼠喉镜经口

6、插管，固定后将气管插管接于小动物呼吸机上；开胸后在上腔静脉根部周围剪开心包，充分暴露上腔静脉，仔细分离出主动脉及其周围血管和结缔组织.去神经组大鼠经上腔静脉根部穿过经10g/L辣椒素处理的试纸（宽2～3mm，长2～3cm）围绕上腔静脉根部一圈，放置30min.每10min更换试纸1次，建立大鼠去辣椒素敏感性窦房结传入神经模型.假手术组动物手术用无水乙醇，T.采用文献［4］中的方法进行免疫荧光染色.一抗和二抗均由小牛血清白蛋白稀释.封片后在激光共聚焦显微镜下观察.2结果手术后各组免疫荧光结果显示窦房结组织区H4免疫荧光染色呈强阳性.共聚焦显微镜观察显示假手术组大鼠H4强阳性表达的窦房结区域可

7、见条索状不规则形的传入神经递质P物质（substanceP,SP）阳性纤维，以窦房结动脉周围分布密度最大，结动脉壁上也有一定量分布.同样，在窦房结区域可见细线状或串珠状的CGRP阳性纤维，以窦房结动脉周围分布密度最大.去神经组大鼠H4强阳性表达的窦房结区域未见到SP阳性纤维.而心房区域仍有一定量SP阳性纤维分布.窦房结区域未见到CGRP阳性纤维.而心房区域仍有细线状的CGRP阳性纤维分布.在同一大鼠中SP的表达与CGRP