ⅰ型胶原基因的克隆及其在正常及年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的表达

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1、Ⅰ型胶原基因的克隆及其在正常及年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的表达作者：刘燕　周健　刘新平　药立波　苏景宽　惠延年【关键词】胶原　　CloningofcollagentypeⅠgeneanditsexpressioninlensepitheliuminnormalandagerelatedcataractouspeople　　【Abstract】AIM:ToclonethegeneofcollagentypeⅠ,tostudyitsexpressioninlensepitheliumofnormalandagerelatedcataractouspeople,and

2、toparethedifferenceofthEirexpression.METHODS:ThecollagentypeⅠgeneprovedsubtractivehybridization,andthefragmentofcollagentypeⅠcDNAalandcataractouslens.RESULTS:CollagentypeIgeneexpressedbothinthenormalandtheagerelatedcataractouslensepithelium.Thepositivecellratealandtheagerelatedcataract

3、ouslensepithelium.ThereisnosignificantdifferencesintheexpressionofcollagentypeⅠgeneinthetayplayanimportantroleintheetiologyofcataractandtheformationofposteriorcapsuleopacificationaftercataractsurgery.　　【Keyessenger;cataract;lens;epithelialcells　　【摘要】目的：克隆Ⅰ型胶原基因并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细

4、胞的表达，并比较二者表达的差异.方法：用改良的消减杂交法克隆Ⅰ型胶原基因，地高辛标记Ⅰ型胶原cDNA片段制作探针，用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达，并作统计学处理.结果：克隆到了Ⅰ型胶原基因的cDNA片段，长约600bp，Ⅰ型胶原在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达；阳性细胞百分率分别为(730±149)%和(750±163)%，阳性表达的积分指数分别为（060±015）和（073±016），经统计分析，P>005，其在年龄相关性白内障晶体上皮细胞的表达与在正常晶体上皮细胞的表达未见明显差异.结论：Ⅰ型胶原在正常晶状体和年龄相关性

5、白内障晶状体上皮细胞中均有表达；在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中，其Ⅰ型胶原的表达较正常晶状体未见减少，提示其可能在白内障的发生及白内障术后的后囊混浊中起重要作用.　　【关键词】胶原；RNA，信使；白内障；晶体；上皮细胞；　　0引言　　在构建年龄相关性白内障差异表达cDNA文库的过程中，我们发现Ⅰ型胶原的cDNA片段存在于该文库中，而Ⅰ型胶原作为广泛存在于人体各组织的物质,又是细胞外基质的4大组成部分之一，Ⅰ型胶原作为一种纤维性胶原，它在细胞的增殖以及组织的疤痕化中起重要作用.晶状体上皮细胞作为晶状体中惟一有分裂活性的细胞，它能分裂分化出晶状体纤维并产生晶体蛋白，

6、能合成基底膜样物质、以及糖胺多糖等细胞外基质，在白内障的发生以及白内障术后晶体后囊混浊中，其作用不可忽视.为进一步证实Ⅰ型胶原在白内障晶体上皮细胞的表达以及其是否存在于正常晶体上皮中，我们直接用临床采集的晶体囊膜标本，用原位杂交方法研究其在正常及白内障晶体囊膜的表达并作了统计学分析，以期为研究白内障的发生以及后发性白内障的形成提供依据.　　1材料和方法　　11材料皮质性年龄相关性白内障（来自白内障超声乳化术中环形撕囊）10例在第四军医大学西京医院眼科和兵工眼科医院取材，正常晶状体前囊膜（来自供角膜移植之眼球）10例在西安市第一人民医院眼科和西京医院眼科取材，取材后迅

7、速冻于液氮中，存于-70℃待用.mRNA提取试剂盒（PolyATractSystem1000）（Promega公司）；SuperscriptⅡ反转录酶（Gibico公司）；SephacrylS400柱（Promega公司）；链亲和素磁珠（Promega公司）；BiotindUTP（Clontech公司）；KlenTaqLA酶（Clontech公司）；LaTaq酶（TAKARA公司）；地高辛DNA标记和检测试剂盒（德国Roche公司），质粒提取试剂盒（上海华舜生物工程公司），胶回收试剂盒（Gibco公司），琼脂糖和高纯度去离子甲酰胺以及硫酸葡聚糖来自美国Sigma