安贺拉滴眼液治疗兔干眼症的免疫病理学研究论文

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1、安贺拉滴眼液治疗兔干眼症的免疫病理学研究论文周清，陈剑，张静辉，杨水平，陈敏【摘要】目的观察安贺拉滴眼液应用于兔干眼症治疗的免疫病理学变化，初步探讨安贺拉滴眼液治疗干眼症的可能机制。方法新西兰白兔20只，制作碱烧伤干眼模型，随机分为对照组和安贺拉组.freelechanismofketorolactromethmineeyedropsinrabbitsdryeyemunopathologicprocessafteritodelsly:theexperimentalgrouptreatedethmineeyed

2、ropsandthecontrolgrouptreatedmunopathologictechniquesandimpressioncytologytest,densityofgobletcell,positiverateofMUC5ACanddensityofinflammatorycellinconjunctivaentalgroupmatorycell（P0.05）.ConclusionKetorolactromethmineeyedropscanreduceocularsurfaceinflammat

3、ionandincreasethenumberofgobletcellsinrabbits,suggestingitisvaluabletodryeye.Keyethmine；dryeye；rabbit；immunopathology干眼是指任何原因引起的泪液质或量及动力学的异常,导致泪膜不稳定和(或)眼表面的异常,并伴有眼部不适症状的一类疾病。干眼的主要症状有眼部干燥、异物感、视疲劳、畏光及视力下降等,轻者影响工作和生活,严重者可导致眼表尤其是角膜组织干燥、融解、穿孔,严重危害视功能［１］。干眼作为最常见眼

4、表疾病有日趋增多的趋势，其药物治疗方法多种［２］：泪液替代疗法、黏液溶解药、局部自家血清、抗生素等。随着干眼发病机制的深入研究，现已认识到由炎症介质介导的炎症反应参与几乎所有类型干眼的病理生理过程。本研究采用新型药物——安贺拉滴眼液作用兔干眼模型，研究其疗效及可能的作用机制。1材料与方法1.1主要仪器与试剂LeicaMEL53型眼科手术显微镜（瑞士UC5AC抗体（美国Sigma公司）。1.2动物选择与分组健康成年新西兰白兔20只，雌雄各半，体质量2.0～2.5kg。随机分为实验组和对照组，每组10只，右眼为实

5、验眼。购自广东省医学实验动物中心，合格证号:SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2006A001。1.3实验方法50mg/2mL盐酸氯丙嗪＋100mg/2mL氯氨酮肌肉注射麻醉兔,.freelm×6mm的滤纸条蘸1mol/L的NaOH溶液置于距兔角膜缘上方2mm的结膜上，90s后立即用100mL生理盐水反复冲洗结膜囊。术后对照组局部应用生理盐水滴眼，每日3次；实验眼局部应用安贺拉滴眼液,每日3次。用药4周后行结膜印迹细胞学检查，并取病变区结膜行组织病理学检查和免疫组化染色检测特异性黏蛋白MUC5AC的表

6、达。1.3.1印迹细胞学检查及PAS染色将孔径为0.2μm的醋酸纤维膜剪成3mm×3mm大小，浸入蒸馏水3～4h，以消除滤纸表面活性，取出晾干高压消毒备用。检查前结膜囊先滴1％爱尔卡因1滴，5min后，滤纸吸去穹隆部泪液，将醋酸纤维膜的粗糙面贴于距上方角膜缘2mm的球结膜表面，轻轻加压，3～5s之后撕下，然后于其左右相邻的区域再各贴一张，φ=95％乙醇固定10～30min，然后依次用0.5％高碘酸氧化，过碘酸希夫染色剂（periodicacidSchiffstaining，PAS）染色，偏重亚硫酸漂洗，苏木素

7、复染，二甲苯透明，中性树脂封片，置于双目光学显微镜下观察上皮细胞的连接，胞核胞浆的颜色，核浆比例（N/C），上皮细胞角化以及杯状细胞密度。1.3.2组织病理学检查用药4周取病变部位球结膜，生理盐水冲洗干净后放入10%甲醛固定液固定。流水冲洗固定组织过夜。依次进行乙醇梯度脱水，φ=70%乙醇15s，80%、90%、95%、100%乙醇各3h。二甲苯透明3次，每次10min。从低熔点石蜡到高熔点石蜡浸蜡共3次，每次1h。将浸蜡后的组织放入包埋盒内，倒入熔化的高效切片石蜡，待凝固后取出石蜡块。将石蜡块安装在切片机的

8、组织固定架上用，调节切片厚度在4～6μm每个石蜡块切2～3张切片。1.3.3免疫组织化学染色将组织片放入20℃温水中展开，贴于玻片上，放入烘箱内烘干5min，依次放入二甲苯脱蜡和95%乙醇各2次，每次1min。PBS（0.01mol/L，PH7.4）漂洗3min×3；4℃1%TrisTriton100通透5min，用PBS漂洗3min×3；加20μL即用型过氧化物酶阻断剂于室温下孵育10min，用