葛根总黄酮提取工艺的比较

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1、葛根总黄酮提取工艺的比较作者:甘琳,周芳张越非池汝安【摘要】目的优选葛根总黄酮的提取工艺。方法采用水浴回流、微波和超声波辅助3种方法提取葛根总黄酮,正丁醇萃取纯化。结果微波辅助提取所得总黄酮提取率最高,提取率为91.68%,纯化后,总黄酮纯度为87.56%;超声波辅助提取次之,提取率为87.88%;水浴回流提取最低,提取率为85.35%。结论微波辅助提取法节能、高效,且污染小,具有应用前景。【关键词】葛根;总黄酮;水浴回流法;微波法;超声波法  Abstract:ObjectiveTooptimizetheextraction

2、processoftotalflavonoidsfromradixpuerariae.Methodsicrog,用95%乙醇溶解并定容于50ml容量瓶中,得0.11mg/ml的葛根素标准溶液。准确吸取该标准溶液0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml于10ml容量瓶中,蒸馏水稀释定容,得系列对照品溶液。以1.0ml95%乙醇加水至10ml作空白对照,于250nm处[7]测定各对照品溶液吸光度,得到吸光度A与总黄酮质量浓度C(mg/ml)的线性回归方程:C=0.01502A-0.000041,r=0.99992。 

3、 2.1.2葛根中总黄酮含量的测定称取干燥葛根10.0g,加入200ml80%乙醇,在80℃水浴下回流提取2h,抽滤。同条件下反复提取6次,得葛根总黄酮提取液,测定提取液中总黄酮浓度并计算葛根中总黄酮含量η为8.4%。  2.1.3葛根提取液中总黄酮含量的测定准确吸取葛根总黄酮提取液1ml于50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释定容,按上述“2.1.1”项的方法操作,测定吸光度,根据线性回归方程计算各提取液中总黄酮浓度。  葛根总黄酮提取率:X=C×50×25010×1000η×100%  其中:X—总黄酮提取率(%);C—由线性回归

4、方程计算出的提取液中总黄酮浓度(mg/ml);50—稀释倍数;250—提取液体积(ml);10—葛根质量(g);1000η—葛根中总黄酮含量(mg/g)。  2.1.4色谱条件InertsilODS-3C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇—水(25∶75);柱温30℃;流速1.0ml/min;检测波长250nm;进样量10μl。  2.2实验方法  2.2.1水浴回流提取法准确称取干燥葛根10.0g,放入三口圆底烧瓶中,加入乙醇,水浴下回流提取后抽滤,滤液冷却至室温,用同浓度的乙醇定容至250ml,得葛

5、根总黄酮提取液,测定该提取液中总黄酮浓度。  2.2.2微波辅助提取法准确称取干燥葛根10.0g,放入三口圆底烧瓶中,加入体积分数为80%的乙醇,微波萃取后抽滤(微波萃取示意图见图1),滤液冷却至室温,80%乙醇定容至250ml,得葛根总黄酮提取液,测定该提取液中总黄酮浓度。  2.2.3超声波辅助提取法准确称取干燥葛根10.0g,放入三口圆底烧瓶中,加入80%乙醇,超声波辅助提取后抽滤,滤液冷却至室温,80%乙醇定容至250ml,得葛根总黄酮提取液,测定该提取液中总黄酮浓度。  2.2.4正丁醇萃取法[8]分别称取各优化工艺

6、下的提取物2g,40ml蒸馏水溶解,用200ml水饱和的正丁醇萃取,将正丁醇相减压浓缩、真空干燥,得黄酮粉末,称重,测定总黄酮的浓度,计算产品纯度及产率。  图1微波萃取仪示意图  3结果  3.1水浴回流提取法优化工艺的确定采用正交实验设计,选取提取时间(A)、乙醇浓度(B)、提取温度(C)、液固比(D)为考察因素,以总黄酮提取率为考察指标,采用L9(34)表。正交实验结果见表1。表1L9(34)水浴回流提取法的正交实验结从表1结果可以看出,各因素对提取效果的影响作用大小依次为C(提取温度)﹥A(提取时间)﹥B(乙醇浓度)﹥

7、D(液固比),其中提取温度对葛根总黄酮的提取效果影响最大,而液固比和乙醇浓度对提取无显著影响。极差分析结果表明,水浴提取葛根总黄酮的优化工艺为A3B2C3D3,即:提取时间120min,乙醇浓度80%,提取温度80℃,液固比20∶1。  按水浴回流提取法的优化工艺进行验证,即按因素组合A3B2C3D3平行提取3次,提取率分别为84.92%,85.16%,85.98%,RSD为0.65%,该工艺稳定可行,葛根总黄酮的平均提取率为85.35%。  3.2微波辅助提取法优化工艺的确定根据水浴回流提取法的实验结果,以80%乙醇为溶剂时

8、总黄酮提取率最高,故微波辅助提取以80%乙醇为溶剂,选取提取时间(A)、微波功率(B)、提取温度(C)、液固比(D)为考察因素,以葛根总黄酮提取率为考察指标,采用L9(34)表,正交实验结果见表2。表2L9(34)微波辅助提取法的正交实验结果由表2结果可知,各因素对提取效果的

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