离心沉淀集菌涂片与罗氏培养痰内结核分枝杆菌结果分析

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1、离心沉淀集菌涂片与罗氏培养痰内结核分枝杆菌结果分析朱变仙赵安所黄文泰朱秋玲（云南省龙陵县疾病预防控制中心云南龙陵678300）【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）45-0239-02【摘要】目的通过离心沉淀集菌方法来提高痰液结核分枝杆菌的检出率。方法采用快速离心沉淀集菌涂片法检测痰液抗酸杆菌，同时痰涂阳性者接种酸性罗氏培养基进行培养对照观察。结果利用离心沉淀集菌方法可提高痰涂片和培养的阳性率。结论此方法操作简便、快速、敏感，其阳性检出率高，便于其他实验室借鉴与改进推广运用。【关键词】结核分枝杆菌离心沉淀集菌痰涂片培养结核杆菌是一类生长

2、缓慢具有抗酸性的细菌，一般不易培养，目前从痰中检测结核分枝杆菌仍是诊断肺结核的重要方法。木文对1647例肺结核患者及疑似患者痰标木进行快速离心浓缩集蘭涂片抗酸染色法和酸性罗氏培养法结果进行分析，以求探讨影响痰涂片和培养结果的各种因素，提高痰涂片和培养的阳性率，为今后结核病实验室提供更实用而科学的检测方法。1材料与方法1.1标木来源2008—2010年在龙陵县疾病预防控制中心拟诊的1647例结核病患者，其中痰涂片阳性337例，随机抽取痰涂片镜检阳性结果在（1一4+）的59例患者留取夜间痰、晨痰各1份，共118份进行结核分枝杆菌分离培养，其中初诊患者47例94份，随访复诊患者12例

3、24份。1.2试剂和培基试剂和酸性罗氏培养基由云南省结核病参比实验室提供。1.3检验方法取肺结核患者的痰标木l-5ml作快速沉淀集菌凉片和罗氐结核分枝杆菌培养。1.3.1快速离心沉淀集菌法将痰液与溶痰剂（W索）按1:3的比例加入，充分混匀使痰液完全消化后取5—8ml于试管内，3000r/min离心15min，弃上清，留沉淀液约0.1—0.15ml,将沉淀物混匀后吸取0.05—0.1ml于玻片正面右则2/3中央处涂片呈10mm×20mm左石的椭圆形，待自然干燥后，火陷固定，抗酸染色镜检阳性者，再做结核分枝杆菌培养。1.3.2结果判断患者留取的标本中，只要其中1份在30

4、0个视野镜检≥2条以上吋，即判定该患者为阳性病例。1.3.3酸性罗氏培养法取患者痰液1一2ml置前处理管中，视标本性状加入1—2倍体职的4%NaOH,涡旋震荡30—60mim,至标本究全液化后室温静置15min,弃除培养基多余的凝固水，用无菌吸管取经处理后痰液标本0.1ml接种于培养基斜面上，使菌液均匀铺满斜面，每份标本接种2支培养管，接种好后斜面向上在37°C恒温培养箱内水平放置24h后直立，继续培养8周。1.3.4结果观察第3d和第7d各观察一次菌落生长情况，以后每周观察一次至满8周，只要一支培养管长菌发现疑似分枝杆菌生长的为阳性，阳性者将培养基直立放置4°C冰箱保存

5、备检；如8周后同一病人4管均未见菌落生长的报告结核分枝菌落培养阴性；出现显著污染以至无法观察的，记录“污染”。污染后的培养管经121°C高压火菌30min按生物安全医疗废物处理。2结果2.1痰涂片镜检两种方法在初诊患者标本中检测结果直接涂片镜检阳性69份，阳性率为20.47%(69/337);采用离心沉淀集菌法涂阳率为93.22%(55/59),两者有显著性差异(x2=9.16，P<0.01)o2.2痰涂片镜检与结核分枝杆菌培养结果在痰涂片阳性(1一4+)随机抽取患者痰标本59例118份共培养236管，有55例110份220管长菌，培养阳性率为93.22%(220/236),其

6、中初治病例47例，长菌46例，长菌阳性率达97.87%；复治病例12例，长菌9例，长菌率为75%。2.3痰涂片阳性与培养长菌情况痰涂片阳性在1+的培奍长菌率在66.67%、2+的在91.67%、3+的在95.12%、4+的在94.32%。涂片镜检阳性菌数≥2+以上的长菌率比1+的阳性长菌率较为理想。涂片培养­阳性55例，涂片与培养阳性符合率为93.2%。2.4长菌情况晨痰培养较夜痰长菌率高,11干酪样、褐色血痰、脓痰培养长菌率较粘液和泡沫痰培养长菌率要好，初治病例标本菌落生长较复治病例理想，初治病例痰标本一般培养8周后多数菌落生长良好可达4+以上，而复治病例培养8

7、周后，虽然有菌落生长，但多数只是几个菌落或单个菌落生长，很少达到4+以上。3讨论3.1结核病是一种感染性疾病，病因很明确，实验室诊断是确诊的主要依据，本文采用快速离心沉淀集菌涂片法，大大提高了痰涂片和结核菌培养的阳性率，尤其是对因菌量少或细菌发生L型变异而不易分离培养成功的标本更奋实用价值。3.2利用快速离心沉淀集菌方法操作简便、快速、阳性检出率高，在肺结核的旱期诊断和疗效观察中将能发挥重要的作用，适合广大基层医疗卫生单位使用。3.3痰结核分枝杆菌培养对发现传染源、确定治疗方案、考核疗效、评