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1、单纯疱疹病毒Ⅱ型感染与男性不育的关系【关键词】单纯疱疹病毒不育聚合酶链反应近年来采用PCR技术研究发现不育男性精液中有病毒感染,与生育男性比较差异有显著性[1]，但病毒感染对精子质量、功能及男性不育疾病的影响原理观点不一致。为探讨精液病毒感染情况,为临床提供抗病毒感染治疗的理论依据,笔者应用聚合酶链反应(PCR)对156例男性不育患者及46例正常生育男性进行了精液HSV-2的检测,以探讨它们之间的关系。1材料和方法1.1研究对象 不育组156例,来自贵港市妇幼保健院男科门诊病人,年龄25-36岁(平均28.6岁),婚龄大于2年,性生活正常,女方无不孕原因。156例中含无精
2、子症23例,少精子症70例,精子低活动率43例,精子液化异常20例。生育组46例,为有健康后代,无泌尿生殖道感染症状与体征、精液常规正常者。1.2试剂及仪器采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR），仪器、试剂盒和质控品均购于中山大学达安基因诊断中心，严格按照说明书操作。仪器为DA-7600基因扩增仪。1.3HSV-ⅡPCR检测精液液化后立即以1000r/min离心10min分离精浆，吸取送检标本700ul置1.5ml离心管中，12000rpm离心5min，弃去上清液（同样操作步骤处理女性阴道分泌物）。沉淀加1ml无菌生理盐水，混匀，12000rpm离心5min，再重复洗涤
3、一次。在沉淀中加入DNA提取液50ul，充分混匀后100℃裂解10min，12000rpm离心5min，取上清液2ul做PCR反应。HSV-ⅡDNA定量检测采用实时荧光定量PCR技术，反应体系及扩增条件见试剂盒说明书。1.4统计学处理采用SPSS10.0软件包对实验数据采用卡方检验分析处理。2结果HSV-2阳性检出结果:不育组156例,DNA阳性91例,阳性率58.3%;生育组46例,DNA阳性7例,阳性率为15.2%;两组比较差异具有统计学意义(χ2=15.2,P<0.01),不育组各种类型HSV-2感染情况见表1。表1 生育组与不育组男性HSV-2感染检测结果
4、例(%)3讨论近年来生殖器疱疹的患病人数越来越多,特别是在年轻人群中,约有30%的人患过生殖器疱疹。生殖器HSV感染与不孕不育机理的研究,目前尚不十分清楚。典型生殖器疱疹(GH)对女性感染主要由性关系传播,会引起女性生殖道感染如输卵管炎、宫颈炎、流产、早产等;对于男性单纯疱疹病毒主要集中在阴茎皮肤等处,还可出现在精液中,感染率为5.7%-60%不等[2-3]。HSV感染导致精液的质量降低,主要表现在精子的存活率、活动力下降,而HSV感染经过治疗得到有效控制后,可提高精液质量、恢复男性生育力有很大帮助[4]。HSV-2的感染可划分为增殖性感染、潜伏性感染、整合性感染和先天性
5、感染。本文结果表明,在两组共98例HSV-2阳性病人中,除4例有生殖器疱疹外,其余均没有明显症状和体征,但均有既往发病史,说明HSV-2的感染大多数为复发性潜伏感染。HSV-2首次感染后,若不经过彻底抗病毒治疗,病毒可潜伏在感觉神经鞘内,约有50%患者原发感染后在半年内复发[5],复发性感染症状比原发感染轻,鉴别不清楚。潜伏感染时由于没有HSV-2抗原产生,用免疫学方法检测不到。实时荧光PCR技术是近几年发展起来的检测技术,在严格的实验条件下,具敏感性高,需要时间短,标本用量少等特点。对症状轻微的隐性感染的早期诊断较为实用。本文结果表明,不育男性HSV-2感染与生育男性比
6、较差异有统计学意义(P<0.01),同时无精子症和少精子症等不育男性患者HSV-2感染较其它类型不育症更为严重。因此,HSV-2可能是引起男性不育的致病因素之一。HSV-2引起不育的原因可能有:(1)HSV-2是一种只带包膜的病毒,具有感染性与抗原性,可粘附于易感的精细胞,并在细胞内增殖,使精子生成障碍。(2)HSV-2感染常与衣原体、淋病奈瑟菌、梅毒螺旋体、人乳头瘤病毒混合感染,从而加速局部的病理损伤,导致生精功能丧失。(3)生殖道感染,尤其是性传播疾病,易使男性产生精子抗体,可能与免疫不育有关。有关HSV-2感染引起不育的作用机理尚未完全清楚,仍有待于进一步研究
7、。但如何及时有效地控制男性泌尿生殖道的感染,对预防男性不育具有重要意义。综上所述，实时荧光PCR是一种新开发的分子生物学检测方法，在应用于单纯疱疹病毒检测时具有准确度高、特异性强、操作简便、结果可靠等优点，对及时有效控制不育患者的泌尿生殖道感染，对预防不育具有重要意义
