长春花碱和秋水酰胺诱导tk6和tk6-e6细胞tk基因突变比较研究

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1、http://www.paper.edu.cn长春花碱和秋水酰胺诱导TK6和TK6-E6细胞TK基因突变比较研究王亚男，张立实*，帅培强，丁晓琴四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室（成都610041）【摘要】目的比较TK6和TK6-E6人类淋巴母细胞TK基因突变试验对两种纺锤体毒物－长春花碱(vinblastinVBL)和秋水酰胺(ColcemidCCM)检出情况的差异。方法用长春花碱和秋水酰胺处理TK6和TK6-E6细胞24小时，进行常规TK基因突变试验。结果长春花碱和秋水酰胺对TK6和TK6-E6细胞均有致突变性，TK6细胞的诱发和自发突变频率低于T

2、K6-E6,而TK6-E6细胞的小集落百分比高于TK6细胞（P<0.05）。结论两种细胞都可用于TK基因突变试验，但由于TK6-E6所用细胞量少，倍增时间较短，故建议使用TK6－E6细胞。【关键词】TK基因突变试验TK6TK6-E6长春花碱秋水酰胺ComparisonofTKgenemutationassayinTK6andTK6-E6cellinducedbyVinblastinandColcemidWANGYa-nan,ZHANGLi-shi,SHUAIPei-qiang,DINGXiao-qing.DepartmentofNutritionandFoodHy

3、giene,HuaxiSchoolofPublicHealth,SichuanUniversity,Chengdu610041,China【Abstract】ObjectiveTocompareTKgenemutationassayinhumanlymphoblastoidcelllinesTK6andTK6-E6inducedbyvinblastinandcolcemid.MethodsRegularTKgenemutationassayswereexperimentedafterTK6andTK6-E6humanlymphoblastoidcellsweret

4、reatedwithvinblastinandcolcemidfor24h.ResultsTK6andTK6-E6cellsbothwereinducedbyvinblastinandcolcemid.TheTK6’snaturemutationfrequencyandinducedmutationfrequencywerelowerandtheTK6-E6’sSC%werehigher.ConclusionBothTK6andTK6-E6celllinescanbeusedinTKgenemutationassay,butTK6-E6celllinewasrec

5、ommendedtobeusedintheassayforitslessquantityanddoublingtime.【Keywords】TKmutationassay；TK6;TK6-E6;Vinblastin；Colcemid自D.Clive等人[1]1972年建立TK基因突变试验方法以来，该试验在发达国家已得到广泛应用，欧美日等已将其列为一组必选的遗传毒性实验之一。近年来，国内也开始推广TK基因突变试验方法。在该试验系统中以小鼠淋巴瘤细胞L5178Y应用最为广泛，来自于人类的TK6、TK6-E6、WTK1等类淋巴母细胞近年也逐渐引入该系统。这几种细胞均来源

6、于人的WI-L2类淋巴母细胞，TK6-E6细胞是在TK6细胞内转入一个HPV16E6基因所得，该基 因产物可结合并降解P53蛋白，因此TK6-E6细胞为P53蛋白缺失型[2]，而TK6细胞为P53野生型。两类细胞在tk位点均为杂合子，故都可用于TK基因突变试验。由于其来源于人类，故在评价化学物遗传毒性方面可能比常规的小鼠淋巴瘤细胞L5178Y更有意义。目前国内尚未见用TK6和TK6-E6细胞TK基因突变试验评价纺锤体毒物的报道，我们在前期研究工作的基础上，使用TK6和TK6-E6细胞进行两种纺锤体毒物（长春花碱和秋水酰胺）的TK基因突变试验，拟进一步验证采用人类淋

7、巴母细胞的TK基因突变试验对纺锤体毒物的检出能力以及P53蛋白对该试验体系检出率的影响，并为筛选出适用于TK基因突变试验的人源细胞敏感株积累资料。基金项目：国家自然科学基金（30471473）和博士点基金（20020610036）资助 作者简介：王亚男（1973～），女，助理研究员，博士研究生，研究方向：分子毒理学。 *通讯作者：张立实（1956～），男，教授，博士生导师。1http://www.paper.edu.cn1材料和方法1.1细胞系人类淋巴母细胞株TK6和TK6-E6，由日本国立卫生研究所提供。1.2培养液RPMI1640培养液，含10％马血清，200

8、μg/ml