反相高效液相色谱法同时测定抗脑衰胶囊中葛根素和2

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1、反相高效液相色谱法同时测定抗脑衰胶囊中葛根素和2【摘要】　　目的建立抗脑衰胶囊中葛根素和2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Nova-PakC18(150mm×3.9mm，4μm)，流速0.8ml·ml-1，乙腈∶水（20∶80）为流动相，检测波长为320nm。结果葛根素的线性范围为0.3056～1.528mg·ml-1，r=0.9997，平均回收率为98.15%，RSD＝1.20%（n=6）；2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为1.024～8.192μg·ml-1，r=

2、0.9995，平均回收率为97.46%，RSD＝2.12%（n=6）。结论该方法简便、快速、准确，适合该胶囊中葛根素和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量测定。【关键词】反相高效液相色谱法葛根素2,3,5,4'四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofpuerarinand2,3,5,4'-Tetrahydroxy-stibene2OβDglycosideinKangnaoshuaicapsule.MethodsRPHPLCn(4μ

3、m,150mm×3.9mm)l·ml-1,thedetection.ResultsThelinearrangeg·ml-1(r=0.9997)，theaveragerecoveryl-1(r=0.9995)，theaveragerecoveryethodissimple,sensitive,accurateandsuitableforthedeterminationofpuerarinand2,3,5,4'-Tetrahydroxy-stibene-2-O-β-D-glycosideinKangnaoshuaicapsule.　　Key的滤膜过滤。　　2方法和结果　　2.1色谱

4、条件m×150mm，4μm），流动相为乙腈∶水（20∶80），流速为0.8ml·min-1，柱温40℃，检测波长320nm。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品15.28mg置5ml量瓶中，加30%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为3.056mg·ml-1的葛根素对照品溶液；精密称取2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品5.12mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.0512mg·ml-1的2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液。　　2.2.2样品溶液的制

5、备取抗脑衰胶囊20粒,倾取内容物，研细，精密称取细粉1.0g，置干燥锥形瓶中，加入甲醇适量，超声30min，室温下过滤，滤液置80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。　　2.2.3阴性样品溶液制备按处方配制不含葛根、何首乌的阴性样品，按“2.2.2”项操作方法制备阴性样品溶液。　　2.3干扰性实验取葛根素对照品溶液、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液各5μl，在上述色谱条件下进样测定。结果见图1。由图1可知样品中的其他组分不干扰葛根素和2,3,5,4'

6、-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的测定。　　2.4线性关系实验　　2.4.1葛根素分别精密吸取葛根素对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置于2ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，按上述色谱条件，依次进样10μl，测定峰面积，将所得峰面积与进样量进行线性回归，回归方程为Y=2.188×107X-1.191×106(r=0.9997)。结果表明葛根素在0.3056～1.528mg·ml-1范围内线性关系良好。　　图1抗脑衰胶囊高效液相色谱图（略）　　2.4.22,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷分别精密吸取2,3,5,4'-四羟

7、基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，按上述色谱条件，依次进样10μl，测定峰面积，将所得峰面积与进样量进行线性回归，回归方程为Y=6.136×106X-1.787×103(r=0.9995)。结果表明2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在1.024～8.192μg·ml-1范围内线性关系良好。　　2.5精密度实验取浓度为0.9168mg·ml-1的葛根素对照品溶液，重复进样6次