穿琥宁粉针剂体外抗hiv

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1、穿琥宁粉针剂体外抗HIV曾祥凤，曾耀英,李海仙，林长乐，赵令斋，李莉平，肇静娴【关键词】穿琥宁粉针剂；艾滋病病毒；细胞融合；钙黄绿素　　AntiHIV1effectinvitroofChuanhuninginjection　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheinhibitoryeffectofChuanhuning(CHN)injectiononhumanimmunodeficiencyvirustype1(HIV1)infectioninvitro.METHODS:Calce

2、inAMstainedH9/HIV1ⅢBcellsediatedcellfusionicroscope.TheprotectiveeffectofCHNonHIV1infectedcellsinedbyMTT.Viralreplicationeasuringthelevelofp24antigeninculturesupernatantsbyELISA.RESULTS:CHNinjectioncouldsuppressthefusionofMT2andH9/HIV1ⅢBcells（EC50:5.49mg/

3、L，SI:327.6）,thusprotectingHIV1infectedcellsfromdeath（EC50:64.57mg/L，SI:27.85），anddecreasingp24antigenrelease(EC50:194.67mg/L，SI:9.23）.CONCLUSION:CHNinjectioncaninhibitHIV1infectioninvitro.　　【Keyg/L，选择指数SI为327.6）；能够保护HIV感染细胞的死亡（EC50为64.57mg/L，SI为27.85）和减少H

4、IV1P24抗原的表达（EC50为194.67mg/L，SI为9.23）.结论：穿琥宁粉针剂在体外具有抗HIV1的作用.　　【关键词】穿琥宁粉针剂；艾滋病病毒；细胞融合；钙黄绿素　　0引言　　随着我国人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，HIV)感染流行形势的日益严重，临床就诊的HIV感染者/AIDS（acquiredimmunodeficiencysyndrome）患者在逐步增多，临床治疗的压力越来越大〔1〕.但由于我国治疗艾滋病的药物开发及研制工作滞后，故目前尚无疗效

5、可靠，经济实用的药物.虽然世界上有公认的治疗艾滋病有效的高效抗逆转录酶病毒联合疗法(highlyactiveantiretroviraltherapy，HAART)，由于价格昂贵且副作用极大〔2-3〕，难为我国患者广泛接受并长期应用.因此，研究和开发有效的传统中药防治艾滋病非常重要.　　穿琥宁是从穿心莲叶中提取的一种纯中药制剂，属于一种低毒高效的抗病毒药.具有抗炎、抗病毒及清热解毒的作用，临床已广泛用于感染性疾病的治疗,尤其对病毒性疾病有较好的疗效〔4-5〕.但穿琥宁对HIV/AIDS的作用报道很少,本研

6、究用不同浓度的穿琥宁和H9/HIV1ⅢB作用观察其是否具有抗HIV1的作用.　　1材料和方法　　1.1材料中药穿琥宁粉针剂（哈尔滨二联药业有限公司）用PBS配制为100g/L存储液，无菌分装，-20℃贮存备用.AZT（叠氮胸苷）(3＇Azido3＇deoxythymidine)（美国BiochemikaFluka）100mg，用二甲亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)配成100g/L，分装-20℃贮存备用.药物存储液于实验前用RPMI1640培养基按需要稀释至所需工作浓度.钙黄绿素（Cal

7、ceinAM，美国MolecularProbes），用DMSO溶解配制成1mmol/L，分装，-20℃贮存备用.噻唑蓝(MTT,Sigma)PBS配制5g/L，-20℃贮存备用.P24抗原检测试剂盒（美国ZeptoMetrix）.RPMI1640培养液(美国Gibco),配制时加入青霉素1×105U/L,链霉素100mg/L,过滤除菌，使用时加入100mL/L(V/V)胎牛血清（FBS）.HIV1ⅢB感染的慢性H9细胞（H9/HIV1ⅢB）和MT2细胞来自美国，由南方医科大学免疫教研室惠赠.　　1.2方法

8、　　1.2.1细胞和病毒培养H9/HIV1ⅢB细胞和MT2细胞用含100mL/L(V/V)FBS的RPMI1640培养基在37℃，50mL/LCO2培养箱培养，2～3d传代1次.进行药物实验前1d再传代换液1次使细胞处于对数生长期.　　1.2.2穿琥宁对细胞的毒性测定采用MTT法〔6〕分别测定穿琥宁对MT2细胞和H9/HIV1ⅢB细胞毒性.观察细胞存活率和求出CC50浓度（50%cytotoxicconcentration，即