大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺研究.doc

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1、大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺研宄作者：赵大洲，邱鹰昆，陈继永，刘淑梅，姜永涛【关键词】蟾皮二烯内酯；，，大孔树脂；，，工艺摘要：目的建立大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺。方法蟾皮醇提液减压回收醇，经石油醚脱脂，水层上DM130大孔树脂，不同浓度乙醇梯度洗脱，TLC显色结合HPLC法检测二烯内酯所在洗脱部位，比色法测定总二烯内酯含量。结果蟾皮中二烯内酯集中在70%乙醇洗脱部分；采用本实验确定的工艺，制得蟾皮总二烯内酯含量为％，收率为％。结论该工艺可以较好地富集蟾皮总二烯内酯。关键词：蟾皮二娣内酿；大孔树脂；工艺StudyonEnrichingTotalBufa

2、dienolidesfromtheSkinofToadbyMacoroporousResinAbstract:ObjectiveToestablishprocessingmethodforenrichingtfromtheskinoftoadbymacoroporousresinextractionoftheskidbywater-petroleumiminatingalcohol.Taddedtothecolumnofesin,andelutedgradotalbufadienolides.MethodsThealcoholnoftoadwasseparate

3、etherphasesafterelhenthewaterpartwasDM130macoroporousruallybyalcohol.ThetotalbufadienolideinwhichpartbyHPLCatwasdeterminedbyUVreferencesubstanceideswasgatheredin7ntoftotalbufadienoctingratewas%.ConegtechnologycanbeusswasidentifiedtobendTLC,andtheconten,telocinobufaginas,attotalbufadi

4、enol0%alcohol.Thecontelideswas%,theextralusionTheprocessinedtoenrichtotalbufadienolidesfromtheskinoftoad.Keywords:Bufadienolides;Macoroporousresin；Process蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍BufobufogargarizansCantor或黑眶蟾蜍BufomelanostictusSchnEider的干燥表皮，临床用于治疗多种癌症、小儿疳积、局限性硬皮病及小儿腮腺炎等。现代药理研究表明，二烯内酯为其主要活性成分，具有抗

5、肿瘤、抗病原微生物及强心等作用［广4］，其分离工艺未见报道。本实验旨在找到一种利用大孔树脂分离蟾皮总二烯内酯的工艺条件。1仪器与材料Waters2487型高效液相色谱仪，Waters515泵，DiscoveryC18柱；UV-2550型紫外分光光度计，1cm石英吸收池；甲醇为分析纯，乙腈为色谱纯；远华蟾毒精对照品；蟾皮药材购自亳州药材市场，产地为山东；大孔树脂DM130购于山东鲁抗医药股份有限公司。2方法分析方法制得远华蟾毒精对照品和蟾皮总二烯内酯的甲醇溶液，在200~400nm之间紫外扫描，测得最大吸收峰分别为nm和nm，确定HPLC法及比色法检测波长为299

6、nm。光远华蟾毒精测定方法Waters2487型高效液相色谱仪；Waters515泵；DiscoveryC18柱；检测波长：299nm;流动相为乙腈水。蟾皮总二烯内酯含量测定方法按分光光度法，在299nm测定远华蟾毒精对照品不同浓度溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为：y=,相关系数：r=l。结果表明，远华蟾毒精对照品在4~W0Pg/ml线性关系良好。样品溶液在299nm测定吸光度，按比色法计算出蟾皮总二烯内酯的含量。大孔树脂上样液的制备称取蟾皮药材150g，剪碎，加入95%乙醇回流提取两次，1500ml/次，合并两次提取

7、液，减压回收乙醇后，加入石油醚萃取两次，水层约150ml，即得。1远华蟾毒精及赡皮总二烯内酯紫外吸收光谱总二烯内酯洗脱剂的选择分别以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇各1000m1洗脱大孔树脂柱，每1000ml接收1份，以HPLC法定性检测远华蟾毒精。TLC定性检测各馏分中的二烯内酯[5]:①硅胶G薄层板，丙酮氯仿环己烷为展开剂，10%硫酸显色；②硅胶G薄层板，氯仿甲醇为展开剂，20%三氯化锑氯仿溶液显色。总二稀内酿样品的制备及检验称取蟾皮药材kg，制得上样液，上大孔树脂柱，先用50%乙醇洗脱除去杂质，再用70%乙醇洗脱，70%洗脱液减压干燥，得

8、蟾皮总二烯内酯，测定含量