明党参遗传多样性srap分子标记09-3-25

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1、明党参遗传多样性的SRAP分子标记王长林，郭巧生[基金项目]国家科技攻关计划项目(2001BA701A59)；国家科技攻关计划项目（2001BA701A62-04）[通讯作者]*郭巧生,Tel:(025)84396591；E-mail:gqs@njau.edu.cn，武玉妹(南京农业大学中药材研究所,江苏南京210095)[摘要]目的：研究明党参的遗传多样性，为明党参种质资源利用提供理论依据。方法：以10个不同居群的明党参为材料，通过SRAP分析，计算各样品间的遗传相似系数，在此基础上采用UPGMA方法进行聚类，构建树状图。结果：从16

2、0个引物组合中筛选得到17个多态性引物组合，共检测到363个基因位点，其中多态性位点有314个，平均每个引物组合产生18.47个多态性位点，多态性位点百分率为86.50%，显示了较高的多态性比率；各居群遗传相似系数在0.4959~0.8182之间；根据聚类结果可将10个不同居群的明党参分为2大类。结论：明党参不同居群间具有高度的遗传多样性；不同居群的亲缘关系与其地理分布有一定的相关性。[关键词]明党参；遗传多样性；SRAP明党参ChangiumsmyrnioidesWolff为我国特有的伞形科单种属植物[1]，1984年被国家列为三级珍

3、稀濒危植物[2]。其药用部位为干燥根，具有润肺化痰、养阴和胃、平肝、解毒的功效，用于肺热咳嗽、呕吐反胃、食少口干、目赤眩晕、疔毒疮疡[3]。明党参主要分布在浙江西北部、江苏西南部和安徽的东南部，向西可延伸到江西北部及湖北东南部。邱英雄等在明党参的资源状况、种群生态、遗传多样性和遗传结构等方面研究了明党参的濒危机制和保护对策[4，5]，并通过分子鉴定的ISSR分析认为明党参的遗传变异主要存在于不同群体间[6]。潘泽惠等[7]对明党参的系统演化进行了研究，认为在地理分布上初步显示了明党参属从西向东扩散迁移的演化路线。厉彦森等[8]对野生明党

4、参居群生物学特征进行了调查比较，并通过明党参的酯酶同功酶电泳酶谱探讨了明党参野生居群间的亲缘关系。SRAP分子标记操作简便迅速、成本低、可靠性好、重复性高，是近几年发展起来的一种新型分子标记技术，已成功应用于多种植物的遗传图谱构建、遗传多样性分析、基因定位及比较基因组学等方面，在药用植物遗传物质分析上有着广阔的应用前景。目前，该项技术已在部分药用植物上得以应用，建立了一些药用植物SRAP分析的反应体系[9～12]，并进行了一些药用植物的遗传多样性分析[13～16]。本研究将SRAP分子标记技术首次应用于明党参的遗传多样性分析，以便为明党

5、参种质资源利用提供理论依据。1材料与方法1.1实验材料实验用明党参样品来源表1所示，原植物经郭巧生教授鉴定均为伞形科植物明党参（ChangiumsmyrnioidesWolff）。各居群多点随机取样30株，盆栽成活后，随机取样10株幼嫩茎叶，混合后趁鲜提取DNA。1.2试剂与仪器CTAB，Tris，EDTA，氯仿，乙醇，NaCl，丙烯酰胺等试剂（分析纯）；RNA酶，dNTPs，Taq酶，DNAmarker（PUC18DNA/Mspl）（均购自北京天根生化科技有限公司）；SRAP引物（上海英俊生物技术有限公司合成）；超纯水；高速冷冻离心机

6、，PTC-200型PCR仪（MJResearch公司），JY600C电泳仪。1.3DNA提取采用CTAB法提取明党参基因组DNA，运用TE缓冲液置于4℃条件下保存。紫外检测所保存的DNA浓度，稀释成浓度为25ng∙μL−1的DNA模板，4℃保存备用。1.4PCR扩增和引物筛选PCR反应体系总体积20μL，其中10×Buffle2.0μL；dNTP（10mM∙L−1）0.5µL；Mg2+(25mM∙L−1)1.6μL；引物（10μmol∙L−1）0.6μL；Taq酶（5U∙μL−1）0.2μL；DNA（25ng∙μL−1）2μL。PCR程

7、序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，35℃复性1min，72℃延伸1min，5个循环；94℃变性1min，50℃复性1min，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min，4℃保存。从ME1-ME20与EM1-EM8共160个引物组合中，筛选出条带清晰、重复性好、多态性丰富的引物组合，用于SRAP-PCR扩增。表1明党参供试样品及来源样品编号样品名称样品来源样品采集点地理信息经度/E纬度/N海拔/m1大龙山安徽安庆大龙山116°54'30°36'79.5~83.22青龙山江苏高淳青龙山118°58'31°58'88.9

8、~97.53茅山江苏句容茅山119°18'31°47'96.5~118.34浮山江苏潥水浮山119°10'31°41'92.3~101.15红山江苏句容红山栽培基地119°13'31°42'41.3~41.