选择性环氧合酶2抑制剂ns398下调k562-adm细胞mdr1-pgp表达

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1、选择性环氧合酶2抑制剂NS398下调K562/ADM细胞MDR1/Pgp表达：何火聪，林根，苏颖，贾静，邹长棪，林华妹【摘要】　　目的探讨选择性环氧合酶2（COX2）抑制剂NS398对白血病多药耐药K562/ADM细胞P糖蛋白（Pgp）表达的影响。方法以细胞K562/ADM为NS398作用的靶细胞，MTT法检测细胞增殖活性；逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测多药耐药基因（MDRl）mRNA的表达；流式细胞仪（FCM）测定Pgp蛋白表达水平。结果NS398显著抑制K562/ADM细胞增殖，呈时间、剂量

2、正相关效应；下调K562/ADM细胞MDRl基因表达并抑制Pgp合成，呈明显的剂量依赖关系。结论COX2抑制剂NS398可在一定时间和剂量范围抑制白血病多药耐药K562/ADM细胞MDRl/Pgp表达，并能抑制K562/ADM多药耐药细胞增值。【关键词】NS398K562/ADM细胞P糖蛋白多药耐药　　环氧合酶(cyclooxygenase，COX)是生物体内催化前列腺素合成的关键酶。已发现其亚型COX2与人类多种肿瘤具有密切联系，可能参与肿瘤的增殖、凋亡、肿瘤血管生成及肿瘤侵袭等，COX2已成为治疗和预防肿瘤的一

3、个重要靶点[12]。近年来的研究显示，COX2可以上调多药耐药基因/P糖蛋白（MDR1/Pgp）的表达，而MDR1/Pgp的过度表达是肿瘤对放、化疗不敏感和导致治疗失败的一个重要原因[3]。因此，进一步明确COX2与MDR1/Pgp在白血病K562/ADM多药耐药细胞中表达的关系，对采用COX2抑制剂逆转或防止肿瘤耐药、增加放化疗敏感性具有重要理论和临床意义。　　1材料与方法　　1.1材料COX2抑制剂NS398（美国Sigma公司）用DMSO配成100mmol/L的贮存液，-20℃保存备用。阿霉素(ADM

4、)（日本明治制药公司）。MTT、二甲基亚酚（DMSO）和RPMI1640(美国AMERSCO公司)。Trizol(美国Invitrogen公司)。二步法RTPCR试剂盒(晶美生物工程有限公司)。MDR1和βactin引物（博亚生物工程有限公司）。异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗人Pgp抗体（BDFarmingen公司）。　　1.2方法　　1.2.1靶细胞K562/ADM细胞由福建省肿瘤医院放射生物研究室诱导保存。细胞接种于3.8μg/mLADM、20%新生小牛血清的RPMI1640培养液中，置37℃、体积分数为0.05

5、的CO2培养箱中培养。实验时K562/ADM细胞一直培养在3.8μg/mLADM的细胞培养液中以刺激MDRl/Pgp高表达。　　1.2.2细胞增殖活性K562/ADM细胞(每孔1×104)接种于96孔细胞培养板中，加入终浓度10～160μmol/L的NS398，培养24，48，72h后MTT法检测，计算细胞增殖抑制率。　　1.2.3MDR1基因mRNA表达Trizol法提取经不同浓度NS398作用后的细胞K562/ADM细胞总RNA，以βactin为内参照，二步法RTPCR检测MDRl基因mRNA表达情况。　　引物M

6、DRl（167bp）：　　上游：5'CCCATCATTGCAATAGCAGG3'　　下游：5'GTTCAAACTTCTGCTCCTGA3'　　βactin（612bp）：　　上游：5'GGCATCGTGATGGACTCCG3'　　下游5'GCTGGAAGGTGGACAGCGA3'　　PCR产物扩增后进行凝胶电泳，凝胶图像分析系统(GeldocXR，美国BIORAD公司)分析。　　1.2.4Pgp表达测定K562/ADM细胞经不同浓度NS398作用后，收集细胞，PBS洗涤，分别加入FITC标记的抗人Pg

7、p抗体，流式细胞仪检测Pgp的表达阳性率。　　1.3统计学处理结果以x±s表示，SPSS8.0软件进行相关统计分析。　　2结果　　2.1NS398对K562/ADM细胞生长的影响NS398对K562/ADM细胞的增殖有明显抑制作用，且呈时间、剂量效应关系(图1）。160μmol/L作用72h的抑制率为62.9%。表明COX2抑制剂NS398可明显抑制K562/ADM耐药细胞的增殖。　　图1NS398作用后对K562/ADM细胞的增值抑制（略）　　Fig1NS398inhibitedtheproliferation

8、ofK562/ADMcells　　2.2NS398对MDRl基因表达的影响NS398可显著抑制K562/ADM细胞MDR1的表达，并呈时间和浓度依赖关系（图2）。在相同的作用时间内，随着NS398作用浓度的增加MDRl表达明显下降；而且在相同的作用浓度下，随着NS39