前列腺特异性抗原启动子调控促凋亡基因caspase

《前列腺特异性抗原启动子调控促凋亡基因caspase》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、前列腺特异性抗原启动子调控促凋亡基因caspase：张更，王禾，张波，于翠娟，武国军，秦卫军，孟艳玲，王成济，杨安钢【关键词】,前列腺肿癌　　【Abstract】AIM：Toconstructtheeukaryoticexpressionvectorthatspecificallydrivespro-caspase-7byprostate-specificantigenpromoter.Byemployingtheprostate-specificantigenpromoter(PSAP),icDNAfrombenignprostatetissuesandobtainedpros

2、tatespecificantigenpromoter（PSAP）fragmentbypolymerasechainreaction(PCR).Usinggenetechnology,ationofitssequenceandPSAPpIRES2EGFPandPSAPpIRES2EGFPCsp7eukaryoticexpressionvectorsediatedgenetransfersedid,pIRES2EGFP,inhumanprostatecancercelllinePC3mand2othercelllines(Hep2［humancanceroflarynx］andMC

3、3T3［micefibroblast］).LightandelectronmicroscopyatetheexpressionofthePSAPdriventranscripts.ImmunohistochemistrymethodsedigestionandDNAsequencing.Aftertransfected,Hep2andMC3T3allshoshoshoeofthePC3mtransfectedcellsmanifestedapoptoticfeatures.CONCLUSION:PSAPdrivenprocaspase7genetherapyinhibitsthe

4、groanprostatecancercellsandthecytotoxiceffectisrestrictedtothecellsofprostateorigin.　　【Keys；regions(geics)promoter；apoptosis；cloning,molecular　　【摘要】目的：构建前列腺特异性抗原启动子（PSAP）调控的促凋亡基因caspase7表达载体并观察其对前列腺癌细胞的促凋亡作用.方法：提取基因组DNA，通过PCR法获得前列腺特异性抗原启动子（PSAP）基因，利用基因重组方法以PSAP替换掉pCDNA3真核表达载体中的pCMV启动子，构建PSAPp

5、CDNA3载体.测序正确后，将PSAP分别替换绿色荧光蛋白载体pIRES2EGFP和克隆入带有效应型caspase7基因的绿色荧光蛋白载体pIRES2EGFPCsp7中的pCMV启动子片段，分别获得由PSAP启动子调控的绿色荧光蛋白载体和带有效应型Caspase7基因的真核表达载体PSAPpIRES2EGFPCsp7.利用脂质体转染法将该载体分别转染至PC3m（前列腺癌）、Hep2（喉癌）及MC3T3（正常成纤维）细胞中，通过荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白表达及细胞形态变化，免疫组化检测细胞中效应型caspase7蛋白的表达状况，细胞计数观察转染不同表达载体后各类细胞生长变化

6、.结果：经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确.转染PSAPpIRES2EGFPCsp7载体后，①在PC3m细胞中可观察到绿色荧光蛋白的表达，并可检测到效应型Caspase7蛋白表达，而在Hep2及MC3T3细胞中未观测到绿色荧光，②荧光显微镜下可见前列腺癌PC3m细胞生长受到抑制并出现凋亡细胞形态，细胞计数证实转染的PC3m细胞生长受到抑制，而其余细胞生长未受影响.③电镜观察结果显示转染PSAPpIRES2EGFPCsp7后的PC3m细胞出现典型的凋亡细胞形态.结论：前列腺特异性抗原启动子（PSAP）可在前列腺癌细胞中特异性调控其下游caspase7基因的表达，并发挥其促凋亡作

7、用，从而特异性地诱导前列腺癌细胞发生凋亡，而对正常细胞及非前列腺起源细胞不产生影响.　　【关键词】前列腺肿癌；启动区（遗传学）；脱噬作用；克隆，分子　　0引言　　目前，前列腺癌的检出率逐年增高，在欧美等西方国家，前列腺癌是男性最为常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于肺癌居第二位.近几年资料显示，我国前列腺癌发病率逐年上升，目前在我国的发病增长率已居泌尿生殖系恶性肿瘤增长率首位.因此，人们试图尝试治疗前列腺癌的有效方法.　　前列腺特异性抗原特异性表达于于前列腺上皮的各类细胞，包括正常