乙型肝炎病毒基因型检测及其与肝功能的关系

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1、乙型肝炎病毒基因型检测及其与肝功能的关系：朱凤群，霍康，李春姬，狄鹏超【摘要】目的探讨乙型肝炎病毒基因型与肝功能的关系。方法采用微板核酸分子杂交ELISA法检测93例不同临床类型的乙型肝炎患者的基因型并同时测定肝功能。结果93例不同临床类型乙型病毒性肝炎患者中，B型24例(25.81%)，C型59例(63.44%)，D型5例(5.38%)，混合型5例(B/D3例，C/D2例，占5.38%)。93例不同临床类型的乙型肝炎患者中，以C基因型为主，其次为B基因型，部分以D型和混合型存在，无A、E、F型。按照慢性乙型肝炎、亚急性重型肝炎、肝硬化的顺序，C

2、基因型的检出率逐渐增多，B基因型的检出率逐渐减少。肝癌患者C基因型的检出率没有依次增高。C基因型各型乙型肝炎患者的ALT、AST、TBIL均高于B型，ALB低于B型，但差别无统计学意义。结论西安地区病毒性肝炎以C基因型为主，部分以B、D及混合型存在，未发现A、E、F型。除肝癌外，C型的检出率随临床类型的加重而增多。【关键词】乙型肝炎病毒；基因型；微板核酸分子杂交；肝功能　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetethodofmicroboardnucleatemolecularhybri

3、dizationployedtodetectthegenotypein93HBVpatientsofdifferentclinicaltypesandthefunctionofliver.ResultsAmongthe93HBVpatientsofdifferentclinicaltypes,thereixedtype(3casesofB/D,2casesofC/D,5.38%).Therefore,genotypeCtookupthelargestproportion,folloixedgenotypes,butthereadidnotrise

4、correspondingly.ThelevelsofALT,ASTandTBILofgenotypeCeofthemixedgenotypes,butnogenotypeA,EorFa,thedetectionrateofgenotypeCroseaccordingtotheseverityofclinicaltype.　　KEYicroboardnucleatemolecularhybridization;functionofliver　　乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染后的临床过程多种多样,除了与宿主的免疫状况、感

5、染方式等有关,与感染病毒株的基因型种类也关系密切。不同基因型的HBV代表着在生物学特性方面的差异，HBV基因分型有助于对病情、治疗及预后的评价。目前各地区的检测方法不同，研究的结论不尽相同。我们采用微板核酸杂交ELISA技术进行基因分型，并同时测定肝功能，评价其对肝功能的影响。　　1材料与方法　　1.1临床资料　　93例患者均来自西安交通大学医学院第一附属医院传染科2005年6月～2005年11月住院患者。诊断标准符合2000年修订的《病毒性肝炎防治方案》，所有患者均排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒混和感染及其他原因引起的肝炎，既往未曾进行抗病毒治疗

6、。其中亚急性重型肝炎4例，慢性乙型肝炎中度25例，重度24例，乙肝肝硬化28例，肝癌12例，男70例，女23例，年龄19～68岁，平均年龄42.40岁。所有血液标本均新鲜分离血清，-25℃保存，待整批检测。　　1.2试剂和仪器　　HBV基因分型PCR微板核酸分子杂交ELISA试剂盒由第一军医大学基础部生物医学诊断研究中心提供。DG3022A型酶标仪为国营华东电子管厂生产。9700型基因扩增仪为美国PE公司生产。　　1.3检测方法　　1.3.1采用微板核酸杂交ELISA技术进行基因分型①引物及探针：根据HBV6个基因型的特异基因序列，选择前C区的

7、不同序列作为PCR引物和核酸杂交探针，6个基因型通用的序列作为PCR的引物和通用包被探针，而同一部位的不同序列作为各型的显色探针，并采用Primer软件设计引物和探针。显色探针5标记Biotin由上海生物工程有限公司合成。序列为：引物W1：CCCTTCTTCGTCTCGCGGTTCC(nt1490～1510)；引物W2：ACCAATTTATGCCTACAGCCTC(nt1798～1777)。　　③微板杂交及酶联显色：将扩增产物98℃变性10min，迅速冰浴10min。各取杂交液90μL，各型显色探针25μL，已变性产物20μL，分别加入反应孔内

8、，轻轻混匀，50℃水浴60min。轻轻弃去上清液后加入200μL杂交洗液，50℃洗涤3～5min，共3次。每孔中加入100μL酶抗体，3