反相高效液相色谱法测定关节克痹丸中大黄素的含量

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1、反相高效液相色谱法测定关节克痹丸中大黄素的含量【关键词】反相高效液相色谱法；,,关节克痹丸；,,大黄素　　摘要：目的建立反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定关节克痹丸中大黄素的含量。方法采用ZobaxC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），以甲醇0.1%磷酸溶液（70∶30）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长282nm，柱温40℃。结果大黄素在0.01~0.2mg/ml范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为97.56%，RSD为1.51%。结论该法操作简便，结果准确、可靠，可作为关节克痹丸的质量控制标准之一。

2、　　关键词：反相高效液相色谱法；关节克痹丸；大黄素　　DeterminationofEmodininGuanjiekebiPillbyRP-HPLC　　Abstract：ObjectiveAnRP-HPLCmethodinationofemodincontentinGuanjiekebipill.MethodsZobaxC18(4.6mm×150mm，5μm)obilephaseconsistedofmethanol-0.1%phosphoricacid(70∶30).Thedetection,theflol/min,andthetemper

3、atureofthecolumnoding/ml(r=0.9999),ethodissimple,sensitiveandaccurate.ItcanbeappliedinqualitycontrolofGuanjiekebipill.　　Keyodin　　关节克痹丸由川乌（制）、草乌（制）、虎杖、独活、秦艽、麻黄等15味中药组成，具有祛风散寒、活络止痛功效〔1〕。临床主要用于关节炎，四肢酸痛，伸展不利。其质量标准中缺少含量测定方法。本文采用反相高效液相色谱法〔2〕测定该中成药虎杖中大黄素的含量。现将结果报道如下。　　1仪器与材料　　1.1仪

4、器Agilent1100LC系统（美国惠普公司）：四元泵、在线真空脱气机、可变波长紫外检测器（VStation工作站；FA2004电子分析天平（上海天平仪器厂）、BP211D电子分析天平（德国Starforias公司）；HS2005D超声波洗涤器（天津鑫洲科技公司）。所用仪器和量具均经校正和检定。　　1.2材料大黄素对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号110756200110）；关节克痹丸及其空白制剂（江苏天士力制药有限公司提供）；甲醇为色谱纯，水为纯净水，其它试剂为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为ZobaxC18(4.6m

5、m×150mm，5μm)；流动相为甲醇0.1%磷酸溶液（70∶30）；检测波长282nm；柱温40℃；流速1.0ml/min；进样量10μl（定量环）。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的大黄素对照品11.02mg，置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.1102mg/ml的对照品溶液。　　2.2.2供试品溶液的制备取样品3g，研细，精密称定，置250ml具塞三角瓶中，精密加入甲醇100ml，密塞，称定重

6、量，置水浴加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸收续滤液50ml置蒸发皿中，蒸干，残渣加5mol/L盐酸30ml及氯仿30ml，水浴加热回流30min，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，分取氯仿液，酸液再用氯仿提取4次，20ml/次。合并氯仿液，蒸干，并转移至10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜滤过，作为供试品溶液。　　2.3标准曲线〔3〕精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的大黄素对照品10mg置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

7、用甲醇配成浓度为：0.01，0.02，0.05，0.10，0.15，0.20mg/ml的标准液，按上述色谱条件分别进样10μl，测定峰面积。以对照品浓度（mg/ml）为横坐标（C），峰面积为纵坐标（A）绘制标准曲线，得大黄素的回归方程为：A=10.43902+51608.21427C(r=0.9999)；大黄素浓度在0.01~0.2mg/ml范围内呈良好的线性关系。　　2.4精密度实验取浓度为0.1mg/ml的对照品溶液在上述色谱条件下重复进样5次，10μl/次，测定峰面积，结果RSD为0.15%（n=5）。　　2.5稳定性实验取同一样品溶液

8、分别于0，0.5，1，3，5，8h进样测定峰面积，结果RSD为0.4%(n=6)，表明样品在8h内稳定。　　2.6重复性实验取同一样品（批号0601002）6份，分