生物药物分析与检验 氨基酸多肽和蛋白质类药品检验ppt课件

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1、第八章氨基酸、多肽因子和蛋白质类药品检验基本要求：掌握氨基酸定性鉴别的方法，熟悉氨基酸特殊杂质及安全性检查，掌握氨基酸含量测定方法，掌握多肽因子类药物的定性鉴别方法，熟悉多肽因子类药物的检查方法，掌握多肽因子类药物生物效价的测定方法，掌握蛋白质类药物的鉴别和检查方法，掌握蛋白质含量测定和效价测定方法，了解几种氨基酸、多肽因子和蛋白质药物的质量分析过程。基本内容第一节氨基酸类药品检验第二节多肽因子类和蛋白质类药品检验第三节几种氨基酸、多肽和蛋白质药物的质量分析第一节氨基酸类药品检验氨基酸是治疗蛋白质代谢紊乱、蛋白质缺损所引起的一系列疾病的重要

2、生化药物，也是具有高度营养价值的蛋白质补充剂，有着广泛的生化作用和临床疗效。目前氨基酸及其衍生物临床应用不断发展和扩大，创制了一些新的生化药物。如甲基酪氨酸治疗嗜铬细胞瘤氧苯丙氨酸用于类癌瘤综合征偶氮丝氨酸治疗白血病乙酰羟脯氨酸用于治疗类风湿关节炎第一节氨基酸类药品检验氨基酸为白色晶状体，熔点很高，多在熔融时分解，都能溶解在强酸强碱中，形成的盐多能溶于水。氨基酸在等电点（pI）时溶解度最小，最稳定。中性pI值在5～6.3左右。酸性pI值在2.8～3.2左右。碱性氨基酸的pI值在7.6～10.8左右。第一节氨基酸类药品检验一、氨基酸的定性鉴别

3、旋光度、熔点、溶解度、纸层析、氨基酸自动化分析、气相色谱等均可作为氨基酸鉴别的依据。1、化学鉴别法氨基酸的鉴别最常用的方法是根据所有氨基酸均能与茚三酮显蓝紫色。采用茚三酮显色法，中国药典（2010年）二部对所收载的氨基酸类药物大多采用此方法进行鉴别。1：酪氨酸2：色氨酸3：苯丙氨酸。第一节氨基酸类药品检验这三种氨基酸可以通过紫外吸收光谱加以鉴别。精密称取酪氨酸、色氨酸、苯丙氢酸各适量。用水制成每1mL含20μg（色氨酸）、40μg（酪氨酸）、200μg（苯丙氨酸）。在波长230～300nm测定各氨基酸的吸收光谱，如右图。第一节氨基酸类药品检

4、验（2）红外吸收光谱图氨基酸在红外区都有特性图谱，可以通过与标准氨基酸图谱比较作为氨基酸的鉴别依据。所得的吸收图谱各主要吸收峰波长和各吸收峰间的相互强度关系均应与对照的图谱一致。第一节氨基酸类药品检验3、薄层色谱鉴别法在薄层板上点样，通过与标准氨基酸对照而鉴别氨基酸。（1）薄层板的制备第一节氨基酸类药品检验（2）十一种氨基酸混合液（色、蛋、亮、异亮、甘、赖、苏、缬、苯丙、组、精）与对照液的制备。第一节氨基酸类药品检验（3）点样、展开和显色吸取混合液和对照液各3μL，分别点于同一薄层板上。以正丁醇-水-异丁酸-醋酸（50︰50︰5︰7）之上层

5、作展开剂，进行单向三次展开，展开约15cm，每次必须待溶剂挥发尽后，再进行下一次展开。喷以显色剂（吲哚醌1g，溶于100mL无水乙醇和10mL冰醋酸中）置100℃干燥5～10min至显色完全为止。第一节氨基酸类药品检验本层析系统中，由于分离的程度与各种氨基酸显出不同的颜色，可以区别十一种氨基酸。用茚三酮-硝酸钠试剂亦能显出不同颜色的色斑，且灵敏度较高。第一节氨基酸类药品检验4、旋光性除甘氨酸外，所有的天然氨基酸都有旋光性，且每种氨基酸的比旋度不同，因此，可以用比旋度作为氨基酸药物的鉴别指标。第一节氨基酸类药品检验二、氨基酸特殊杂质及安全性检

6、查1、特殊杂质检查氨基酸原料药所含有的特殊杂质一般为一些其他种类的氨基酸。用薄层色谱法进行限量检查：将样品配成一定浓度的供试品液，取一定量供试品液稀释后作为对照液，在同一硅胶G薄板上，一般用正丁醇︰水︰冰醋酸（3︰1︰1）展开晾干后，喷茚三酮的丙酮溶液显色，规定供试品所显杂质斑点的颜色不得深于对照液主斑点，以此限制其他氨基酸的含量。第一节氨基酸类药品检验2、安全性检查影响氨基酸安全用药的因素除其中的一般杂质，主要为热原的含量。中国药典所收载的氨基酸基本上都规定了热原检查。采用家兔法，将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内观察家兔

7、体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。第一节氨基酸类药品检验三、氨基酸含量测定1、茚三酮法茚三酮法是氨基酸定量测定应用最广泛的方法之一。当茚三酮在酸性条件下和氨基酸反应时，氨基酸被氧化分解生成醛，放出氨和二氧化碳，水合茚三酮则成还原型水合茚三酮。然后还原型茚三酮与氨，另一分子茚三酮进一步缩合生成蓝紫色物，最大吸收值的波长为570nm。茚三酮反应为一切α-氨基酸所共有，反应灵敏，根据反应所生成的蓝紫色深浅，可以测定氨基酸含量。本法可允许的测定范围是0.5～50μg氨基酸。第一节氨基酸类药品检验2、酸碱滴定法谷氨酸、天冬氨酸

8、和赖氨酸赖氨酸（lysine）片中赖氨酸的测定取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于赖氨酸0.15g）置烧杯中，加水25mL，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）