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1、不同样本处理方法对显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的影响作者：王万相,郭乃洲,严爱华,马力,周步全,马达,景奉香,唐向荣，庄严【关键词】痰标本；结核分枝杆菌DNA；抽提;显色法；耐药基因；基因芯片 ［摘要］目的:选择一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法，用于显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药基因。方法:选择3份含结核分枝杆菌分别为4.325×103、6.857×104、5.356×105Copies/ml的痰液，分别用Chelex100树脂法、煮沸法、
2、蛋白酶K消化异丙醇沉淀法、蛋白酶K消化酚/氯仿抽提法、碱裂解法、异硫氰酸胍裂解法、盐酸胍裂解法、离心柱法抽提结核分枝杆菌DNA作多重聚合酶链反应，显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因。结果:离心柱法检测结果阳性，其余方法检测结果均为阴性，离心柱法检测灵敏度为2.743×103Copies/ml。结论:离心柱法是一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法,可用于显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因。 ［关键词］痰标本；结核分枝杆菌DNA；抽提;显色法；耐药基因；基因芯片 Effec
3、tofVariedSampleTreatmentProceduresonDetectionoftheResistanceGenesofRifampinandIsoniazidinMycobacteriumTuberculosisDNAbyUsingColorationGenesChips Abstract:ObjectiveTochooseamoreidealmethodtodirectlyextractMycobacteriumtuberculosisDNAfromsputumsampletodetectthere
4、sistancegenesofrifampin(RFP)andisoniazid(INH)inMycobacteriumtuberculosisbyusingColorationgenechips.MethodsChoosethreesputumsampleswhoseMycobacteriumtuberculosisrespectivelywere4.325×103,6.857×104and5.356×105Copies/ml.Respectivelyusechelex100resinate,boilingextrac
5、tion，proteinaseKdigest/isopropanolprecipitation,proteinaseKdigest/phenol/chloroformextraction,alkalinelysis，guanidinethiocyanatelysis，guanidinehydrochloridelysis,spincolumnmethodtoextractMycobacteriumtuberculosisDNAformultiplepolymerasechaineraction.ResultsTheres
6、ultofspincolumnmethodwaspositive.Otherswerenegative.Thesensitivityofspincolumnmethodwas2.743×103Copies/ml.ConclusionThespincolumnisamoreidealmethodtoextractMycobacteriumtuberculosisDNAfromsputumsample,whichcanbeusedto6detectresistancegenesofRFPandINHinMycobacteri
7、umtuberculosisbyusingcolorationgenechips. Keywords:Sputumsample;MycobacteriumtuberculosisDNA;Extract;Coloration;Resistancegene;Genechip DNA芯片技术是近几年发展起来的进行大规模遗传多态性检测的新方法，是物理学、微电子学与生命科学等学科的交叉结合，具有高灵敏、高通量等优点，通过一次测定可获得大量信息。芯片法检测结核分枝杆菌的耐药基因，是近年来研究较多的一个课题［1～7］，由于结核分枝
8、杆菌全基因扩增或多重PCR的困难性，目前研究结核分枝杆菌耐药基因多采用结核分枝杆菌临床分离株作DNA抽提［1,5,8,9］，这给临床早期诊断，早期治疗带来了严重问题。我们选用了8种DNA抽提方法直接抽提痰液中结核分枝杆菌DNA，用于显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药基因检测，现报告如下。
