分析化学选论

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1、一、试述毛细管电泳的基本原理，特点及其发展趋势电泳分离的基础n=meEn为离子移动的速度;me为电泳迁移率;E为毛细管柱进样端至检测窗口间电场强度。离子的电泳迁移率不同，在电场中移动的速度不一样，利用这个原理可以把不同的离子彼此分离。电泳迁移率与分析物质所带电荷呈正比，与摩擦阻力系数呈反比。如果两种物质带有不同的电荷或者通过缓冲溶液移动的摩擦力不同，那么这两种物质可以彼此分离。优点：1高质量灵敏度：常用紫外检测器检测限可达10-13一10-15mol，激光诱导荧光检测器(LIF)则达10-19一10-21mol。•2高分辨率：每米理论

2、塔板数为几十万，高者可达几百万乃至几千万．•3高速度：许多分析可在几十秒内完成．所需样品少：只需纳升(10-9)的进样量。•4成本低：只需少量的流动相和低廉的毛细管。•5应用范围广：除分离生物大分子外，还可用于小分子(氨基酸、药物等)及离子(无机及有机离子)．甚至可分离各种颗粒(如细胞、硅胶颗粒等)。缺点：1进样不够方便，应用范围相对狭窄。•2分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测，但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。•3由于检测池的体积小和光路短,紫外法的应用受到一定的限制。发展趋势：21世纪将是生命科学大发展

3、的世纪。完成人类基因组计划后，后基因时代的基因组学和蛋白组学将快速发展，功能基因的分离、检测，功能蛋白的分离、测定对CE提出更高的期望。小chip将是CE发展的一个重要趋向，将一个实验室的工作集成到一块很小的芯片上，能使仪器微形化。可以预见，不久就会出现各种专用的基因检测、疾病诊断的小型chip及仪器。将会研制适合CE用的各种检测器，以进行单细胞和单分子的检测。单细胞检测为在分子水平上了解细胞的各种行为提供了强有力的工具，而单分子检测为在单个分子水平上开展化学动力学，反应动力学等研究提供了可能性。此外，CE在环境科学中也会有较大发展余

4、地。CE是正在发展的研究领域，有很多理论及实际问题有待解决，更需其它领域的研究人员来扩大其应用范围。CE的成长将为生命科学、材料科学、环境科学提供又一强有力的研究手段，CE也在不断解决难题的过程中得到发展。二、化学发光免疫分析的类型有几种？其特点各是什么？1、直接化学发光免疫分析直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时

5、只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。2、化学发光酶免疫分析是利用标记酶的催化作用，使发光剂（底物）发光，这一类需酶催化后发光的发光剂称为酶促反应发光剂。化学发光酶免疫分析（chemiluminescenceenzyme　immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与

6、待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。3、电化学发光免疫分析是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。4、临床应用化学发光免疫分析的优点1)、灵敏度高：这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达10-16/-21m

7、ol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍2)．线性范围宽：发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。也优于放射免疫分析技术。3)、安全性好：彻底消除了放射性危害，环保、安全。到目前为止，还未发现CLIA的危害性。4)、试剂有效期长有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用

8、成本，利于推广应用。5)、光信号持续时间长辉光型（glowtype）的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。容易实现连续、动态、重复测定6)、分析方法简便快速绝大多数分析测定均为仅需加入一