玉足海参糖胺聚糖抗血栓形成的研究

玉足海参糖胺聚糖抗血栓形成的研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com华血液学杂志2006年9月第27卷第9期ChinJHematol,September2006,Vol27,No.9·579··论著·玉足海参糖胺聚糖抗血栓形成的研究沈卫章周荣富王学锋丁秋兰王鸿利【摘要】目的研究玉足海参糖胺聚糖(GAG)抗血栓形成作用的机制。方法分别用不同浓度的GAG与人血管内皮细胞株EA.hy926共孵育24h;GAG(10mg/L)或肝素(10U/mL)分别与EA.hy926细胞孵育不同时间,检测细胞培养上清中游离组织因子途径抑制物(TFPI)的抗原含量和活性水平;定量测定EA.hy926细胞内TFPImRNA水平;观察细

2、胞内、细胞表面TFPI荧光强度的变化。采用凝血酶、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、氯化钙建立正常人混合血浆的体外凝块溶解实验,分别加入不同浓度的GAG和(或)凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)特异的抑制剂羧基肽酶抑制物(CPI),观察凝块的凝固和溶解时间,以及TAFI相关的凝块溶解延滞(TRR)时间。结果GAG以浓度和时间依赖的方式促进内皮细胞TFPI的合成、表达和分泌。低浓度GAG(0.1mg/L和0.5mg/L)延长了血凝块的溶解时间,而较高浓度的GAG(5mg/L和10mg/L)能够缩短血凝块的溶解时间。GAG以浓度依赖的方式缩短TRR。结论GAG促进血管内皮细胞TFPI的合成、表

3、达和分泌,可以抑制TAFI功能,促进血栓的溶解。【关键词】糖胺聚糖;内皮细胞;组织因子途径抑制物;凝血酶激活的纤溶抑制物;肝素Antithromboticmechanismsofholothurianglycosaminog1)rcanextractedfromseacucumberSHEN—zhang,ZHOURong-fu,ⅣGXue-feng,DINGQiu—lan,ⅣG舶ng一.ShanghaiInstituteofHaematology,RHnHospital,Shanghaijiaotonge,Shanghai200D25,ChinaCorrespondingauthor:WA

4、NGHong—li,Entail:wanghongli602@163.corn【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheantithromboticmechanismsofholothurianglycosaminogly—can(GAG)extractedfromseacucumber.MethodsHumanendothelialcelllineEA.hy926cellsweretrea—tedwith10nq【g/LGAGorIOU/mLunfractionatedhepafin(UFH)byshort-term(15rain一2h)andlonger—t

5、imeincubation(6h~48h).DifferentdosesofGAGwereusedtostimulateEA.h~926.Releasedfreetissuefactorpathwayinhibitor(TFPI)wasdeterminedbyELISAassay.TFPIexpressionwasinvestigatedbyimmunofluoreseentmethodandTFPInlRNAlevelbyrea1.timePCR.Ina96一wellsmicrotitreplate.poolednormalplasmacontainingdifferentconcent

6、rationsofGAGwasallowedtoclotbyadditionofthrombinandcalciumchloride.fibrinolysiswasinducedbyadditionoft-PA.TRR(TAFI—relatedretardationofclotlysis)wasusedtoassessthrombin.activatablefibrinolysisinhibitor(TAF1)functionalactivity.ResultsGAGincreasedTFPIsynthesis.expressionandsecretioninadose—andtimede

7、pendentmanner.GAGatlowconcentrationscouldlengthenwhileatintermediateconcentrationscouldshortenclotlysistimessignificantlyascomparedtocontrolvalues.TRRwasdose.dependentlydecreasedonadditionofGAG.ConclusionsGAGincr

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