SNT2916-2011出口食品中桔霉素的测定方法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法.pdf

《SNT2916-2011出口食品中桔霉素的测定方法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２９１６—２０１１出口食品中桔霉素的测定方法免疫亲和柱净化高效液相色谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮犻狋狉犻狀犻狀犻狀犳狅狅犱犳狅狉犲狓狆狅狉狋—犐犿犿狌狀狅犪犳犳犻狀犻狋狔犮狅犾狌犿狀犮犾犲犪狀狌狆犪狀犱犎犘犔犆犿犲狋犺狅犱２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜２９１６—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

2、本标准由中华人民共和国山东出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：鲍蕾、许艳丽、张艺兵、吕宁、吴振兴、石媛嫄。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜２９１６—２０１１出口食品中桔霉素的测定方法免疫亲和柱净化高效液相色谱法１范围本标准规定了使用免疫亲和柱净化结合高效液相色谱测定出口食品中桔霉素的方法。本标准适用于大米、玉米、辣椒、红曲制品中桔霉素的检测。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所

3、有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３方法提要试样中的桔霉素用甲醇水提取，提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，采用液相色谱结合荧光检测器测定桔霉素的含量，外标法定量。４试剂和材料除特殊规定外，所用化学试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１甲醇：ＨＰＬＣ级。４．２乙腈：ＨＰＬＣ级。４．３三氟乙酸：ＨＰＬＣ级。４．４氢氧化钠。４．５２ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠溶液：称取８０．０ｇ固体氢氧化钠（４．４），溶于１０００ｍＬ水中。４．６桔霉素（ｃｉｔｒｉｎｉｎ）标准品：１ｍｇ，纯度≥９９．０％。４．７标

4、准储备液：准确称取一定量的桔霉素粉末（４．６）以甲醇（４．１）溶解并定容至１０．０ｍＬ作为标准储备液，浓度为１００μｇ／ｍＬ，于４℃下保存。４．８标准中间储备液：准确移取１．０ｍＬ上述桔霉素标准储备液（４．７）于１０ｍＬ容量瓶中，用甲醇定容，浓度为１０μｇ／ｍＬ，于４℃下保存。４．９标准工作液：用上述标准中间储备液（４．８），根据需要配制成适当浓度的标准工作液。ＴＭ４．１０免疫亲和柱：ＣｉｔｒｉＴｅｓｔＨＰＬＣ柱（非商业性声明），或者相当。４．１１三氟乙酸水溶液：１０００ｍＬ超纯水中加入０．５ｍＬ三氟乙酸（４．３），氢氧化钠溶液（４．５）调节ｐ

5、Ｈ２．５。４．１２稀释液：用氢氧化钠溶液（４．５）将三氟乙酸水溶液（４．１１）的ｐＨ调节至７．５。４．１３洗脱液：甲醇三氟乙酸水溶液（４．１１）（７０＋３０，体积比）。１标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜２９１６—２０１１５仪器与设备５．１分析天平：感量０．００１ｇ。５．２高速均质器：１２０００ｒ／ｍｉｎ。５．３高效液相色谱仪配荧光检测器。５．４混匀器。５．５纯水系统。５．６玻璃纤维滤纸。６操作方法６．１提取称取粉碎样品１０．０ｇ（精确至０．１ｇ）于２５０ｍＬ具塞锥形瓶中，加入５０ｍＬ甲醇水（７

6、０＋３０，体积比）提取液，以均质器高速搅拌提取２ｍｉｎ，过滤，得滤液。移取１．０ｍＬ上步的滤液，置于另一干净的容器中，加入４９ｍＬ稀释液（４．１２）稀释、混匀。以玻璃纤维滤纸过滤几次，直至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化。６．２免疫亲和柱净化将免疫亲和柱连接于１０ｍＬ玻璃针筒下，准确移取１０．０ｍＬ（相当于０．０４ｇ试样）上述澄清滤液过免疫亲和柱，以１滴／ｓ～２滴／ｓ的流速全部通过亲和柱：加入５ｍＬ稀释液（４．１２）以１滴／ｓ～２滴／ｓ的流速淋洗柱子，直至空气进入到亲和柱中，弃去全部流出液；准确加入１．０ｍＬ洗脱液（４．１３）进行洗脱，洗脱流速

7、为１滴／ｓ～２滴／ｓ。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。６．３测定６．３．１色谱条件６．３．１．１色谱柱：ＺＯＲＢＡＸＳＢＣ１８柱长１５０ｍｍ，内径４．６ｍｍ，粒度５μｍ，或相当者。６．３．１．２流动相：乙腈三氟乙酸水溶液（６０＋４０，体积比）。６．３．１．３流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。６．３．１．４检测条件：激发波长３３１ｎｍ，发射波长５００ｎｍ。６．３．１．５进样量：标准５μＬ、样品１００μＬ。６．３．２色谱测定移取适量的标准工作液，以甲醇稀释成５个不同浓度的标准工作液，以其保留时间进行定性，以化学工作站建立标准工作液中桔霉素的响应值

8、与桔霉素含量的线形方程，并对样液的色谱数据进行处理。在上述色谱条件下，桔霉素的保留时间为３．１８ｍｉｎ左右，参见图Ａ．１。６．３．３空白实验除不加试样