医药学医学毕业论文 结核杆菌pepck免疫作用的初步研究

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学医学论文题目：结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究指导老师：XXX二〇一一年十二月十日作者：柏雪莲王志强刁兴华张珍刘春会郭立东【摘要】目的初步研究结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶（PEPCK）的免疫作用。方法用敲除pckA基因的卡介苗（BCG△pckA）和野生型卡介苗（BCGWT）分别感染小鼠，取肺脏进行病理分析；取脾脏用流式细胞仪检测CD4+、CD8+T细胞、CD4+/CD8+，酶联免疫吸附试验检测IL12；取脾脏进行结核杆菌的培养，比较两组菌落数量。结果BCG△pckA感染的小鼠比BCGWT感染

2、的小鼠肺脏内产生的结核结节少且不典型，炎性程度低；BCGWT感染的小鼠脾脏内的CD4+T细胞和CD4+/CD8+及IL12滴度明显高于BCG△pckA感染的小鼠；BCG△pckA株形成菌落的数量明显低于BCGWT株形成菌落的数量。结论pckA基因为结核杆菌生长所必需，其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应，可能是一种很好的疫苗候选分子。【关键词】结核杆菌；pckA基因；磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶；免疫保护【Abstract】ObjectiveToresearchtheimmuneeffectofphosphoenolpyruvatecarboxykinase(PEPC

3、K)ofmycobacteriumtuberculosis.MethodsMicewereinfectedwithwildtypeBCGandpckAmutatedBCGrespectively.Thelunghistologyofinfectedmicewaschecked.ThenumberofCD4+andCD8+Tcells，CD4+/CD8+wereassayedbyflowcytometry.Interleukin12wasdetectedbyELISA.BCGfromspleensoftwogroupsofmicewasculturedandthenumber

4、ofCFUwastakencount.ResultsGranulomasinpckAmutatedBCG(BCG△pckA)infectedmicewerefewerandmoreatypicalthanthoseinmiceinfectedwithwildtype(BCGWT).ThenumberofCD4+TcellsandtheratioofCD4+/CD8+fromtheBCGWTgroupweresignificantlyhigherthanthoseformBCG△pckAgroup.Thetiterofinterleukin12ofBCGWTinfect

5、edmicewashigherthatthatofBCG△pckAgroup.AndthenumberofBCGCFUfromBCGWTgroupwasmorethanthatofBCG△pckAgroup.ConclusionpckAgeneisnecessaryforthegrowthofmycobacteriumtuberculosis.PEPCKcaneffectivelyinduceimmuneresponsesandcanbeagoodcandidateforvaccine.【Keywords】mycobacteriumtuberculosis,pckAgene

6、,phosphoenolpyruvatecarboxykinase,immuneprotection结核病是由结核杆菌感染所致的慢性传染病。世界上约有1/3的人感染结核［1］。现在使用的预防结核的卡介苗，保护作用从0%～80%不等，很不稳定。另外，现在由于药物的应用，多种药物抗性结核分枝杆菌已产生。所以寻找既可作为抗结核的疫苗，又可作为抗结核药靶的候选分子是当今研究的热点。基因组分析发现，结核杆菌含有pckA基因，其编码72kD的磷酸烯醇型丙酮酸羧基酶（phosphoenolpyruvatecarboxykinase,PEPCK），催化草酰乙酸和磷酸烯醇型丙酮酸之间的可逆性反

7、应。PEPCK在结核致病和诱导机体免疫中可能起重要作用。本研究用敲除pckA基因的牛结核菌BCG感染小鼠，观察引起肺的病理变化和对淋巴细胞、细胞因子产生的影响，并检测了BCG在体内的生长情况；初步研究了结核杆菌pckA基因编码的PEPCK对结核杆菌生长的重要性及其免疫保护作用，为进一步研究提供了依据。1材料与方法1.1主要试剂及仪器RPMI1640培养液购于SCIENCE生物公司，HE和耐酸染剂购于上海市试剂工贸有限公司。检测细胞因子的单抗为美国BDPMG公司产品，碱性磷酸酶标记的兔抗大鼠IgG结合物为