药学毕业论文--免疫层析法测定动物源性食品中磺胺嘧啶残留

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1、免疫层析法测定动物源性食品中磺胺嘧啶残留作者：王喜亮金秀娥李奎熊宁石德时毕丁仁【摘要】建立了动物源性食品中磺胺嘧啶残留的免疫层析快速测定方法。用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体作为显色剂，磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维素层析膜上作为捕获试剂，采用竞争反应模式制成胶体金免疫层析试纸。该免疫层析试纸可以在15min内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测。读条系统判定灵敏度为5ng/ml，肉眼判定检测限灵敏度为10ng/ml，与其它磺胺类药物无交叉反应。该方法在不同动物源性食品(鸡肉、鸡蛋、鸡肝、猪肉、猪肝、牛奶、蜂蜜)中添加磺胺嘧啶的回收率在68.1%～118.8%范围内。动物试验样品检测结果

2、表明，该方法与ELISA及HPLC具有好的符合率。该方法灵敏度高,检测准确、简便、快速，有良好的开发应用前景。【关键词】胶体金；免疫层析；磺胺嘧啶ABSTRACTAnimmunochromatographicassay(ICA)wasdevelopedforthedetectionofsulfadiazineinfoodproductsofanimalorigin.Basedonthecompetitivereactionmechanism,thecompetitorofsulfadiazinewascoupledwiththenitrocellulosemembranesac

3、tedasthecapturereagent.16Colloidalgoldwascoulpedwithmonoclonalantibodyagainstsulfadiazineservedasthedetectionreagent.Withthismethod,semiquantitativedetectionofsulfadiazinecanbecompletedinlessthan15min.Thesensitivitytosulfadiazinewas5ng/mlbystripreaderand10ng/mlbyeyemeasurement,andnocrossre

4、activitywithothersulfonamides.Therecoverieswerefrom68.1%～118.8%indifferentfoodproductsofanimalorigin(chickenmuscle,egg,chickenliver,porcinemuscle,porcineliver,milk,honey).ResultsofanimalexperimentalsamplesshowedthattherewasagoodagreementratebetweenICAandELISAaswellasHPLC.Thismethodissensitiv

5、e,accurate,simple,rapidandwithaprominsingusageinpracticalapplication.KEYWORDSColloidalgold;Immunochromatography;Sulfadiazine16磺胺嘧啶(SD)是应用广泛的抗菌药物之一，在畜牧业生产中被广泛应用，但它有许多副作用。另外，长期应用许多细菌可对其产生抗药性［1］。磺胺嘧啶的不合理使用将导致其在动物源性食品中残留，并通过食物链进入人体，给人体健康带来潜在的威胁。我国以及美国、欧盟等国家规定了动物性食品中磺胺嘧啶的最高残留限量(MRLs)为0.1mg/kg。目前检

6、测磺胺嘧啶残留的常用方法主要是高效液相色谱法(HPLC)［2，3］和酶联免疫吸附试验(ELISA)［4，5］，该方法灵敏、准确，但需要昂贵的设备，需要专业人员操作，而且操作烦琐，检测时间长，成本高，推广使用受到一定限制。免疫层析方法是一种新型的检测方法，具有简便、快速、准确、费用低和不需要专业人员操作等优点，适用于免疫学领域中的快速检测分析。目前，该方法已被应用于药物残留分析［6～8］。针对磺胺嘧啶残留检测方法存在的缺陷及免疫层析方法的优点，在本研究中我们利用免疫层析方法实现了动物源性食品中磺胺嘧啶残留的的快速检测。1材料与方法1.1主要材料16冷冻离心机，HITACHI公司；

7、ZX1000点膜仪，CM4000切条机，TSR3000读条系统，BioDot公司；抗SD单克隆抗体，本实验室保存；羊抗鼠IgG，华美生物工程公司；磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲口恶唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹口恶啉、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、克伦特罗、氯金酸(HAuCl4·4H2O)，Sigma公司产品；氯霉素，中国药品生物制品检定所；硝酸纤维素膜、玻璃纤维，Millipore公司产品；磺胺嘧啶残留ELISA检测试剂盒，RANDOX公司；高效液相系统，Waters公司生产。1.2方法(