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1、樱桃离体培养研究进展山东农业科学ShandongAgriculturalSciences2005年第6期樱桃离体培养研究进展郑红军,刘庆忠(山东省果树研究所,山东泰安271000)摘要:本文着重介绍了茎尖,茎段培养在樱桃上的应用,茎尖,茎段培养的技术要点及主要影响因素,组培苗的生根培养及驯化移栽,以及樱桃叶片,不定根和幼胚离体培养的研究进展.并对樱桃离体培养存在的问题和不足提出了三点建议.关键词:樱桃;离体培养中图分类号:$662.9文献标识号:A文章编号:1001-4942(2005)06?0069-04樱桃(Prunus)的离体培养研究始于2O世纪8O年代[.?,经过2O多年的发展,目前
2、已在茎尖和茎段培养,叶片离体培养,不定根培养,胚培养等方面取得了重要进展.1茎尖,茎段培养1.1应用在樱桃的离体培养中.以茎尖,茎段作为外植体最为广泛.目前已在Colt,SD一13,Gisela等砧木[],甜樱桃红灯,莫利,大紫等15个品种[",乌克兰大樱桃["],中国樱桃乌皮[2,中华矮樱桃[2",草原樱桃希望和阿泰斯卡娅【.=]及酸樱桃[2上培养成功.有的被应用于培育无病毒苗木,快速繁殖及建立试管苗无菌体系的实践中.采用茎尖,茎段培养可以在短期内大大提高繁殖率.在MS培养基上.pH为5.8时乌克兰大樱桃继代培养45天左右,增殖系数可达11C"].草原樱桃培养3O天后,增殖系数高达5.6C
3、..莫利甜樱桃继代培养45天增殖系数可达1O.4C.乌皮樱桃在MS和FH培养基中继代培养3O天.增殖倍数在7~12之间[..茎尖,茎段培养是培育无病毒植株的一个重要途径.樱桃病毒病普遍而严重,并且还不能彻底脱除.2O世纪9O年代以后大量采用热处理和茎尖培养相结合培育无病毒苗木的方法在樱桃上得到了广泛的应用[2".在果树育种中用茎尖,茎段培养的方法可大大缩短育种年限.据研究,樱桃茎尖培养有5~7的试管苗可以诱导发生变异[1,利用这些变异进行果树营养系选种具有重要意义.宁淑香等[g]已建立了6种樱桃砧木的无性系.无性系的建立,可以为樱桃生产提供大量整齐一致,抗病抗寒的优良砧木.为樱桃生产的工厂化
4、育苗奠定了基础.同时,也为樱桃提供脱毒苗.培育抗寒高产优质的苗木提供了前期基础.1.2茎尖,茎段培养的技术要点及影响因素1.2.1品种大多数植物组织培养时外植体的诱导及试管苗生根,不同种类品种,不同无性系间均存在一定差异.宁淑香等[1]发现,6种樱桃砧木在同一培养基中分化收稿日期;2005—04—01存在着差异.1.2.2取材及接种时期不同取材时期及接种时期影响茎尖培养成活率.覃兰英等[2']试验表明:樱桃休眠后取材,其成活率均高于生长期,休眠前期.王然等【=报道,矮樱桃在3~5月取材.只需进行一次消毒,外植体的污染率可控制在8.3以下,且在继代培养时.芽的增殖情况优于其它时期取材的芽.代红
5、艳等[1试验认为甜樱桃夏季取材,可供接种的茎尖数较少,但成苗率较高(27.3~37.5);冬季取材,枝条上可供接种的茎尖数较多,但成苗率低(8.3~23.7).1.2.3外植体的选择在茎尖,茎段培养中.由于品种不同,选材有所不同.矮化砧木SD一13C,Colt【'],日本抗寒砧木北海道["],中华矮樱桃[.",莫利甜樱桃[],乌克兰大樱桃["皆取萌动芽枝条或嫩梢作外植体培养成苗;草原樱桃于越冬前和早春萌芽前取1年生枝条上的腋芽∞],甜樱桃红灯,大紫,雷尼尔等["],XephyeC],毛樱桃[皆取冬季休眠芽作外植体,乌皮樱桃[2,大樱桃矮化砧木GiselaCo]取休眠枝条作外植体培养成苗.这些
6、研究表明.不同的樱桃品种茎尖,茎段培养所选用的外植体材料不同.这是由不同品种的生理特性所决定的.1.2.4外植体的消毒消毒方法因植物材料的种类和采集时期不同而不同,但一般的方法为:①外植体的前处理,即将外植体浸入稀释的肥皂液中浸泡,再用软刷或油画笔轻轻刷洗外植体表面,除去外植体表面的尘土和部分菌体,然后用自来水冲洗.除去皂液和污物[2.②接种前的消毒,先用7O~75乙醇浸蘸1O~50s,再用0.1HgCI2浸泡5~10min,最后用无菌水冲洗4~5次.用0.1HgCI.在消毒时间为5~15rain的范围内,其灭菌效果相同,以灭菌5rain最好,且试管苗增殖比较容易.1.2.5培养基在离体培养
7、条件下,不同的植物要求不同的培养基.同一种培养物在不同的培养基上又有不同的表现.茎尖,茎段培养多以MS为基本培养基,但也有L培养基钉,Fl'培养基[镐],WPM培养基,Knop培养基,sc培养基等["钉,总的看来,MS培养基或加以改良的MS培养基即可满足需要.69蔗糖是常用的碳源[2,也可用白糖代替蔗糖以降低成本[50圳.周素平等【6用食用冰糖代替蔗糖,对毛樱桃试管苗的生长,生根率和根长均无明显差异,且可大大