shengyou鼠尾胶原蛋白说明书

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1、鼠尾胶原蛋白o无尘车间内生产，保证洁净度o可用于包被细胞培养器皿(单分子层包被)o也可形成具有一定强度的三维胶用于细胞的三维空间培养o通过细胞培养测试(包括三维胶内的细胞培养)o电泳结果和Sigma的同类产品无显著区别。o产品为无菌的溶液，省去从干粉配制的麻烦。包装规格产品号包装规格200110-1010mg,5mg/ml,溶解于0.006mol/LHAc,无菌。200110-5050mg,5mg/ml,溶解于0.006mol/LHAc,无菌。产品说明杭州生友生物技术有限公司生产的鼠尾胶原蛋白I型(rattai

2、ltendoncollagentypeI)是通过Birkedal-Hansen1的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。生友鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。生友鼠尾胶原蛋白包被的培养皿中生长的PC-12细胞生友鼠尾胶原蛋白三维胶中生长的NIH-3T3细胞（接种后5天）和Sigma鼠尾胶原蛋白(cat#C7661)SDS-PAGE电泳对比。A:SigmaB：生友使用方法1、细胞培养

3、器皿的表面包被推荐浓度：1-5ug/cm2以包被浓度为2ug/cm2为例：用无菌0.006mol/L(0.36g/L)乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按表(一)体积加到相应的培养器皿中：表面积(cm2,每孔或每皿)加入0.012mg/ml胶原的体积(ul)96孔细胞培养板0.35024孔细胞培养板1.930012孔细胞培养板3.86006孔细胞培养板9.5158035mm细胞培养皿8133060mm细胞培养皿213500100mm细胞培养皿559170确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜

4、晾干。也可以在室温放置1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在4-25℃至少可保存3个月以上的时间。2、三维胶原的制备生友鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。生友胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X体积的0.1mol/LNaOH来中和。需要的溶液(均需要无菌、预冷):10xPBS(可含10mg/L的酚红用于pH指示)或10x培养液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),

5、双蒸水A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul生友鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul10xPBS或10x培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右

6、)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。B．含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul生友鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul10xPBS或10x培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或

7、培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。注：鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。1、Birkedal-Hansen,H.1987.Catabolismandturnoverofcollagens:Collagenases.MethodsEnzymol.144:140-171.