反义寡核苷酸转染a375细胞实验条件的优化

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1、反义寡核苷酸转染A375细胞实验条件的优化【摘要】　　目的研究不同的转染条件下，Survivin反义寡核苷酸(ASODN)对体外培养的人恶性黑色素瘤细胞A375生长的影响。方法通过对ASODN进行硫代修饰、脂质体运转及培养条件的改变，用倒置显微镜、台盼蓝计数观察SurvivinASODN对A375细胞增殖的抑制作用。结果硫代修饰ASODN经脂质体包裹对细胞生长抑制作用明显强于未经脂质体包裹组(P<0.01)；②细胞培养6h贴壁后进行转染对细胞的生长抑制率明显高于24h后进行转染(P<0.05)；③转

2、染期间(4h)无血清存在组与相应对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)；④ASODN转染后12-72h，对细胞的抑制效应逐渐升高，72h达顶峰，之后开始回落；⑤与混杂组(SODN)及错配组(MODN)相比，反义组在各个浓度对细胞生长抑制作用最明显，各浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论许多因素影响ASODN的转运，不同的实验应选择不同的实验优化条件。【关键词】survivin；恶性黑色素瘤；反义寡核苷酸；脂质体；细胞培养　　Experimentalstudiesofoptimized

3、transfectionconditiononhuman　malignantmelanomacellbysurvivinantisenseoligonucleotide15　　ABSTRACT:ObjectiveToobserveeffectsofsurvivinantisenseoligonucleotideonproliferationofhumanmalignantmelanomacellinvitroindifferenttransfectioncondition.MethodsByusingtrypa

4、nblueexclusionmethod,thisstudyscreenedoptimizedtransfectionconditionthatinhibitedA375cellviability.Results①Bythephosphorothiotemodificationandtheliposomeencapsulation,thereweresignificantdifferencesinASODNwithASODNL.ASODNLwerestrongerininhibitingA375cellpr

5、oliferation(P<0.01).②6hoursafterplating,antisenseoligonucleotidetransfectedA375cell,growthsuppressionrateofcellswashigherthan24h.③During4htransfection,comparedtotheserumpresentgroup,theserumfreegrouphadgreatereffectonthecellgrowth(P<0.01).④Theinhibit

6、oryeffectofASODNgraduallyroseat12-72haftertransfection,72hreachedthepeak,andafterthattheinhibitoryratebegantofall.⑤ComparedwithMODNandSODN,ASODNatdistinctconcentrationhadthehighestinhibitiononthecellgrowth,andthereweresignificantdifferencesindifferentgroups(

7、P<0.01).ConclusionManyfactorsinfluencedantisenseoligonucleotideuptakeinvitro.Differentexperimentshouldselectdifferentoptimal15transfectioncondition.　　KEYWORDS:survivin;malignantmelanoma;antisenseoligonucleotide(ASODN);liposome;cellculture　　反义寡核苷酸(antisens

8、eoligonucleotide,ASODN)由于作用特异性高、设计合成简单、费用低，已广泛用于封闭在肿瘤发病中起关键作用的基因，并已取得了实验室阶段的初步成功。目前ASODN在细胞内转运面临严重的挑战。ASODN长度、序列、修饰、运转载体、细胞类型、培养液和培养条件都影响ASODN的细胞内摄取。本研究通过观察对凋亡抑制蛋白SurvivinASODN进行硫代修饰、脂质体包裹及改变不同的