反相高效液相色谱法测定白芍提取物中芍药苷的含量

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1、反相高效液相色谱法测定白芍提取物中芍药苷的含量【关键词】反相高效液相色谱法；芍药苷；白芍；提取物　　白芍RadixPaeoniaeAlba是一种重要的补血类中药，具有养血敛阴、平抑肝阳、柔肝止痛、调节免疫等功效，用于肝阴不足、肝阳上亢，肝郁脾虚，血虚、或阴虚血热、失血、盗汗等症。而芍药苷(paeoniflorin)是中药芍药的主要有效单体成分。根据相关的文献［1］报道，既往研究证明芍药苷有抗自由基损伤，抑制细胞内钙超载和抗神经毒性等活性，体内实验证明其有降低血液黏度、抗血小板聚集、扩张血管、改善微循环、抗氧化、抗惊厥等作用。现经国内外

2、进一步研究，发现其具有神经保护作用。6　　中药作为一种天然产物，因其产地、气候、生长环境等各种因素的影响，质量差异很大。要想保持原产物的质量均一性而进行质量控制难度相当大。因此，对中药提取物的质量研究成为中药现代化研究的重要方向之一，而控制中药提取物的质量也是实现中药现代化的重要手段。2005年版《中国药典》只收载了少数品种的提取物及其质量控制方法，而且其流浸膏和浸膏只采用了渗漉的方法制备。但渗漉法制备费时费力，还要浪费大量的溶剂。本文采用煎煮的方法，依流浸膏的制备流程制得白芍的提取物。并根据有关的文献［2］，建立了高效液相色谱法测定

3、白芍提取物中的主要成分芍药苷的含量的定量方法，旨在用于白芍提取物的质量控制。实验证明，本方法简便快捷，精密度高，重复性好。　　1仪器与试药　　Dionex高效液相色谱仪，P680泵，ASI-100自动进样器，PDA—100检测器，TCC—100柱温箱，Chromeleon液相色谱工作站。　　芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200629，供含量测定用）；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯；其它试剂为分析纯。　　中药原料白芍由市场购得4个批次，由本所中药室鉴定。　　2白芍提取物的制备　　　　分别取4个批次样品用粉碎机粉碎

4、成粗粉，加水适量，水浴回流30min。回流两次，第二次10min。滤过，合并滤液，浓缩至每克提取物相当于1g原白芍粗粉。　　3方法与结果　6　　3.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.3）为流动相；波长：230nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；色谱柱：Dikma250mm×4.6mmC18柱。进样量10μl。　　3.2溶液的配制　　3.2.1对照品溶液的制备精密称取经减压干燥的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含60μg的溶液，即得。　　3.2.2供试品溶液的制备　　取本品提取物0.5g

5、,精密称定，置水浴上蒸干，残渣加稀乙醇约30ml，超声处理（功率240W，频率45KHz）30min，置50ml量瓶中，放冷，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　3.3标准曲线的制备取芍药苷对照品药3mg,置10ml量瓶中,用甲醇溶解,再从中吸0.1，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0ml置2ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。进样20μl，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果，芍药苷在0.015～0.15mg/ml范围内浓度与峰面积有良好的线性关系，回归方程A=0.86

6、49C-0.2034,相关系数r=0.9998(n=6)。　　3.4精密度实验取对照品溶液，连续进样5次，每次10μ6l，记录色谱图与峰面积，RSD为1.2%（n=5）表明仪器的精密度良好。　　3.5稳定性考察精密吸取同一供试品溶液10μl，每间隔一定时间，注入高效液相色谱仪测定1次。重复进样5次，结果RSD为1.6%，表明供试品溶液在24h内稳定。　　3.6重复性实验取同一批号的样品5份，按含量测定方法测定，结果平均含量为1.43%，RSD为11.1%(n=5)。　　3.7加样回收实验取已知含量的白芍提取物5份，精密称定，水浴蒸干。

7、依次分别加入一定量芍药苷对照品，依照上述供试品溶液的制备方法制备，按照“样品测定”项下方法测定。结果见表1。表1芍药苷的回收率实验（略）　　3.8含量测定分别取4个样品提取物的供试品溶液，每个样品做4个检测。结果如表2。表2芍药提取物中芍药苷的含量（略）　　4讨论6　　中药质量控制一直是困扰药学研究的难题,也是阻碍中医药现代化发展的重大障碍。药学研究工作者想尽各种办法来尽可能控制中药的质量，但关键性的技术难题解决还没有取得突破性进展。尽管目前研究中药提取物等中间产物成为中药学研究的热点，但人们还没有解决如单味药的质量控制，中药复方配伍

8、中的成分相互作用及其机制、以及如何从理论上进行表达等基础性的问题。虽然有文献报道［3，4］，研究了金银花、蒲公英等中药提取物的质量控制，因为中药不同部位质地等方面的不同，用渗漉的方法不一定能完全提取其有效成分；如果改用有