tt病毒感染病人肝组织中tt病毒分布特点研究

《tt病毒感染病人肝组织中tt病毒分布特点研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、TT病毒感染病人肝组织中TT病毒分布特点研究作者：邓传珍李银鹏姜岭梅朱惠明【关键词】原位PCR【摘要】目的探讨TT病毒感染病人肝组织中TT病毒分布特点。方法建立改良原位PCR技术，用以检测血清TT病毒阳性病人的肝组织标本，观察TT病毒在肝组织中分布特点。结果在肝细胞、肝癌细胞及内皮细胞中，TT病毒主要分布在细胞核。结论TT病毒是一种嗜肝性病毒，肝细胞、肝癌细胞及内皮细胞的细胞核是其复制场所。关键词原位PCR肝组织TT病毒【Abstract】ObjectiveToexploredistributionof

2、TTvirusinlivertissueinpatientsinfectedwithTTvirus.MethodsAmodifiedinsituPCRforTTviruswasestablished.HepaticspecimensofpatientswithpositivetestforTTviruswasexaminedtoobservedistributionofTTvirusinlivertissue.ResultsTTviruswasdistributedinthenucleusofhepat

3、ocytes，hepaticcarcinomacellsandendotheliocytesinliver.ConclusionTTVishepatotropicvirusandtheduplicationismainlyinthenucleusoftargetcells.KeywordsinsituPCRlivertissueTTvirus5TT病毒是一种单链环状DNA病毒［1，2］，TT病毒感染者肝脏中病毒的分布及其意义目前尚不清楚。我们建立了改良原位PCR法并检查血清TT病毒DNA阳性病人的肝组织

4、标本80例，以观察TT病毒感染病人肝组织中TT病毒的分布特点，现报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1病人血清TT病毒DNA阳性病人80例，男64例，女16例，年龄为21～78岁，平均年龄56.2岁。80例患者中慢性肝炎30例，肝硬化22例，肝癌18例，外伤性肝破裂10例。1.1.2肝组织标本经巢式PCR法检测血清中TT病毒DNA阳性病人，通过肝穿或手术切除获得肝脏标本，用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，厚4μm。1.1.3TTV引物合成根据Okamoto等［3］报道的TTV基因序列，采用

5、Goldkey软件，在TTV开放读码框1（ORF1）的高度保守区设计两对套式引物，委托上海Sangon生物工程公司合成。1.1.4原位PCR引物以套式引物的T3、T4为引物，T2的5′-端以地高辛标记，委托上海sangon生物工程公司合成。1.2方法1.2.1肝脏TTV改良原位PCR检测1.2.1.1肝脏石蜡切片处理常规脱蜡，蛋白酶K37℃消化，用PBS漂洗，多聚甲醛后固定，贴基因框。1.2.1.2PCR扩增PCR缓冲液6μl，25mMMgCl210.8μl，dNTPs4.8μ5l，T2、T3各1.2μ

6、l，BSA2.4μl，水加至60μl。94℃变性3min，按下列参数循环:94℃1.5min，56℃2min。1.2.1.3扩增后处理去基因框，洗片，羊血清封闭，1∶100Anti-Dig-AP亲和，NBT及BCIP显色，显色满意后水洗中止反应，脱水，透明，封闭，在显微镜下检查。1.2.1.4结果判定细胞内出现紫兰色颗粒为阳性。1.2.1.5对照分别用无引物、无Taq酶及DNaseⅠ预处理等条件作为对照。1.2.2统计学方法肝组织检查结果用χ2检验。2结果TT病毒在肝组织中的分布特点见表1。肝炎、肝硬化

7、和外伤性肝破裂病人的肝脏中，TT病毒主要分布在肝细胞核内与内皮细胞核内，极少数位于肝细胞浆内。肝炎标本中，TT病毒呈散在分布，汇管区周围稍密集，肝硬化标本假小叶内TT病毒呈散在分布。肝癌细胞中TT病毒位于肝癌细胞核内，癌组织周围肝细胞内TT病毒散在分布。表1不同肝病肝脏标本中TT病毒分布特点（略）3讨论巢式PCR技术是诊断血清中存在TT病毒的主要方法［4］5。然而血清TT病毒检测结果并不能反映TT病毒感染后在肝组织中的定位与分布。我们应用改良原位PCR技术对病人血清TT病毒阳性病人的肝脏标本检测结果表明

8、，TT病毒感染肝细胞、肝癌细胞及内皮细胞后，主要分布特点是在细胞核内，极少数分布在细胞浆。这种分布特点从形态学上提示TT病毒具有嗜肝性，其复制场所主要在其靶细胞核。在肝细胞癌标本中，可见TT病毒分布于肝癌细胞核内及肝癌组织周围，这种分布特点是否能提示TT病毒与肝细胞癌之间的关系，尚待进一步研究。本研究对原位PCR法进行了改进，检测效果较好。长期以来，人们用直接原位PCR法通常用放射性同位素、地高辛或生物素标记dUTP。但实验证明直接原位PC