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1、SPLUNC1多肽抗体的设计、制备与鉴定ISSNlO07.7626CN11-3870/Q中国生物化学与分子生物ChineseJournalofBiochemistryandMolecularB——i2006年6月22(6):513—518?研究简报?SPLUNC1多肽抗体的设计,制备与鉴定周后德,赵瑾,张晋,欧阳珏,周鸣,彭淑平,李小玲,李桂源(中南大学肿瘤研究所,长沙410078)Design,PreparationandIdentificationofSPLUNCIPeptideAntibodyZHOUHou.D
2、e,ZHAOJin,ZHANGJin,OUYANGJue,ZHOUMing,PENGShu-Ping,LIXiao-Ling,LIGui-Yuan(CancerResearchImt~ute,Central-Southern,Changsha410078,Ch/na)摘要通过设计SPLUNC1蛋白的一段多肽,快速制备抗SPLUNC1的多肽抗体,检测多肽抗体的性能,为SPLUNC1的功能研究提供可靠的平台.用DsGene1.1软件分析SPLUNC1蛋白的跨膜结构域,二级结构,疏水性,亲水性以及抗原性等,综合考虑抗体设计
3、的其它因素,设计出两段15～20个氨基酸的多肽.将合成后的多肽与钥孔戚血蓝素(keyholelimpethemocyanin,KLH)偶联,同时初筛出宿主血清与SPLUNC1无交叉反应的新西兰家兔,用与KLH相连的SPLUNC1多肽免疫家兔,2个月后获取血清,亲和纯化出抗SPLUNC1多肽抗体,通过ELISA法检测其效价,免疫印迹与免疫组化检测其特异性与适用范围.通过该方法得到了高效价与高特异性的SPLUNC1多克隆特异性抗体,ELISA法测定其效价可达到1:10,通过对包含有PLUNC家族不同成员的蛋白混合物进行W
4、estern印迹检测证明,该多肽抗体具有较高的特异性,不与同一家族中的其它蛋白发生交叉反应,而且该抗体可用于免疫组化,说明所制备的分泌性蛋白SPLUNC1抗体具有高特异,高效价等特点,将为SPLUNC1基因的功能研究提供有用的研究材料.关键词SPLUNC1;多肽抗体;特异性中图分类号R361SPLUNC1是一种在人的呼吸上皮特异性表达的基因¨J,与小鼠的上腭,肺及鼻咽上皮克隆(palate,lungandnasalepitheliumclone,PLUNC)基因高度同源,在猪,牛,大鼠等物种中都高度保守,分子量为26
5、kD.在人类,至少发现有8个家族成员,都位于人类20号染色体大约300kb的狭窄区域——20q11.而在所有物种中至少包含14个家族成员,它们分别定位在人的20号,小鼠的2号,大鼠的3号染色体,结构与LBP及BPI相似.又按照它们的大小分为两组,一组为长片段的PLUNC(1ongplunc,LPLUNC),包括484个氨基酸的LPLUNC1,458个氨基酸的LPLUNC2,463个氨基酸的LPLUNC3,大于469个氨基酸的LPLUNCA,它们都含有15个或16个外显子;另一组为短片段的PLUNC(shortplun
6、c,SPLUNC),包括256个氨基酸的SPLUNC1,249个氨基酸的SPLUNC2及253个氨基酸的SPLUNC3,它们包含有9个外显子.分析表明,PLUNC家族成员在其5'端均具有l9个氨基酸的信号肽序列,因而他们可能是一种分泌性的蛋白.生物信息学研究发现,SPLUNC133.3%位于细胞外,33%位于线粒体,22%位于内质网,还有11%位于细胞内的小泡,通过蛋白质的三维结构预测并与已知蛋白结构数据库进行匹配,PLUNC蛋白与人类的其它2个蛋白家族具有相似性,即杀菌,渗透增强蛋白(bactericidal/pe
7、rmeability-increasingprotein,BPI)和脂多糖结合蛋白(1ipopolysaccharide.bindingprotein,LBP)家族,胆固醇酯转移蛋白(cholesterolestertransferprotein,CETP)及磷脂转移蛋白(phospholipidtransferprotein,PLTP)家族.SPLUNC只含有一个BPI结构域,这个结构与对应的是BPI三维结构上位于N末端的桶状收稿日期:2005.11-30,接收日期:2006.01.06国家自然科学基金项目(No.
8、30300205)资助.联系人Tel:0731-4805383.E?mail:Ligy@xysm.net.Received:November30,2005;Accepted:January06,20O6SupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.3o3oo2o5)'CmT℃哪Mnd
