分离自蜂蜜中的嗜渗酵母的实时荧光pcr法快速鉴定

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1、分离自蜂蜜中的嗜渗酵母的实时荧光PCR法快速鉴定陈世琼1蔡雪凤1逄波2韩玥3伊鋆1任岩1（1北京市海淀区产品质量监督检验所北京100094；2中国疾病预防控制中心北京102206；3北京市出入将检验检疫局北京100026）摘要：嗜渗酵母是导致蜂蜜腐败的主要微生物。鲁氏接合酵母是嗜渗酵母中最常见的种类。酵母的传统生化鉴定方法繁琐、耗时。为快速鉴定分离自蜂蜜的嗜渗酵母的种类，本研究建立了针对鲁氏接合酵母的实时荧光PCR快速鉴定方法。并用此方法对分离自蜂蜜的62株嗜渗酵母进行了快速鉴定，发现其中21株为鲁氏接合酵母。实时荧光PCR方法鉴定鲁氏接合酵母，全过程仅需约5小时，与常用的生化鉴定方

2、法相比，简化了鉴定步骤，提高了鉴定准确性，缩短了鉴定时间。关键词：蜂蜜嗜渗酵母实时荧光PCR鉴定Rapididentificationofeosinophilsyeastisolatedfromhoneybyreal-timePCRmethodShiqiongChen1*XuefengCai1*BoPang2YueHan3JunYi1(1BeijingHaidianDistrictProductsQualitySupervisionandInspectionInstitute,Beijing,100094;2ChineseCenterforDiseaseControlandpreve

3、ntion,Beijing,102206;3BeijingEntry-exitInspectionandQuarantineBureau,Beijing,100026)Abstract:Osmophilicyeastisthemainmicroorganismwhichleadhoneytocorruption.Zygosaccharomycesrouxii(Z.rouxii)wasthemostcommontypeofosmophilicyeast.Thisstudyestablishedareal-timePCRforrapididentificationofZ.rouxii.S

4、ixtytwostrainsofosmophilicyeastisolatedfromhoneywererapidlyidentifiedbythisrealtimePCRmethod.Theresultsshowedthat21ofthemwereZ.rouxii.ToidentifiyZ.rouxiibyreal-timePCRmethod,thewholeprocessonlyneedsabout5hours.Comparedwiththecommonlyusedbiochemicalidentificationmethods,therealtimePCRmethodismor

5、esimple,accurateandtimesaving.Keywords:honey;Osmophilicyeast;RealTimePCR;identification【中图分类号】TS255.1【文献识别码】A【文章编号】蜂蜜较其他食品而言，具有高糖、高渗透压等性质，因此具有一定的抑制微生物生长的作用，所以蜂蜜中所具有的微生物种类与数量是相对较少的[1,2]。但是，酵母、霉菌，以及一些能够形成芽孢的细菌，能够在高糖、低水分活度的环境中生存，它们也经常给蜂蜜产业带来问题[3,4]。酵母能够影响蜂蜜产品的货架期和质量的稳定性[5]。蜂蜜中出现的酵母主要有两类：一类为嗜渗酵母（os

6、mophilicyeast），另一类为耐高糖酵母（sugar-tolerantyeasts)，其中嗜渗酵母对蜂蜜品质影响较大[4,6,7]。嗜渗酵母中，已有的研究报道表明，有结合酵母（Zygosacchuromyces）、酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）、针孢酵母（Nematospora）和圆酵母（Torula）被从蜂蜜或其它高糖食品中分离出来[4,8-10]。鲁氏接合酵母是常见的嗜渗酵母，能引起蜂蜜及其加工产品变质。因此，2011，中华人民共和国卫生部发布并实施了《食品安全国家标准—蜂蜜》（GB14963-2011），代替了《蜂蜜卫生标准》（GB14963

7、-2003）以及《蜂蜜》（GB18796-2005）标准[11]。新标准除了对蜂蜜的定义、蜜源要求等进行了增订、修改外，还增加了对嗜渗酵母的计数要求[12]。传统酵母菌鉴定，包括蜂蜜中的鲁氏酵母的鉴定，一般采用传统生化鉴定方法。此方法耗费时间长，且操作步骤繁琐[13,14]，一般需要1-2周才能完成[14]。分子生物学技术的发展，为分离自蜂蜜的接合酵母的快速鉴定提供了新的替代方法[15]。实时荧光PCR技术具有快速、灵敏、特异性强等优点，是一种极具优势的分