第二十八章食品功能性成分的测定

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1、第二十八章食品功能性成分的测定本章要点1.低聚糖的测定方法2.大豆异黄酮的测定方法3.总皂苷的测定方法4.褪黑素的测定方法5.肉碱的测定方法6.免疫球蛋白IgG的测定方法7.EPA和DHA的测定方法8.超氧化物歧化酶的测定方法9.总谷胱甘肽（GSH）含量的测定方法10.大蒜辣素含量的测定方法11.核苷酸含量的测定方法12.糖精含量的测定方法13.牛磺酸含量的测定方法14.甘草苷含量的测定方法15.膳食纤维含量的测定方法16.枸杞子多糖含量的测定方法17.香菇多糖的测定方法18.磷脂含量的测定方法19.花生四烯酸含量的测定方法20.β-胡萝卜素含量的测定

2、方法21.维生素E和胡萝卡素含量的测定方法22.微量硒含量的测定方法23.有机锗含量的测定方法24.茶多酚含量的测定方法25.儿茶素含量的测定方法43第一节低聚糖——低聚果糖和异麦芽低聚糖的测定方法(高效液相色谱法)本方法适用功能性食品中低聚糖的检测。一、方法提要低聚糖各组分用高效液相色谱法分离并定量测定，以乙腈、水作流动相在碳水化合物分析柱上糖的分离顺序是先单糖后双糖，先低聚后多聚，以示差折射检测器检测。低聚糖的检测有外标法和内标法，但由于功能性食品一般只需报告低聚糖的总量，故可用厂家提供的基料作对照样，在相同的分离条件下以面积比值法求出样品中低聚糖

3、含量。二、仪器1.高效液相色谱仪：WatersHPLC，510泵，410示差折射检测器，数据处理装置。2.超声波振荡器。3.微孔过滤器(滤膜0.45μm)。三、试剂1.乙腈(色谱纯)。2.水（三蒸水并经Milli-Q超纯处理）。3.低聚糖对照品：低聚糖难得纯品，故可用厂家提供的基料。为对照品。低聚果糖（Fructooligosaccharide）：国产：一般含蔗果三糖（GF2）、蔗果四糖（GF3）、蔗果五糖（GF4）。液状基料：含量约＞35%。固状基料：含量约＞50%。进口：从蔗果三糖（GF2）至蔗果七糖（GF6）有液状、固状，30%～96%多种规格。

4、异麦芽低聚糖：有液状、固状，一般含量＞50%。4.对照样品溶液根据保健食品所强化的品种，准确称取低聚果糖或异麦芽低聚糖基料分别于100mL的容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，配成低聚果糖约5～10mg/mL或异麦芽低聚糖约5～10mg/mL的对照样品溶液。四、测定步骤1.样品处理（1）胶囊、片剂、颗粒、冲剂、粉剂（不含蛋白质）的样品43用精度0.000lg的分析天平准确称取已均匀的样品(由于低聚糖原料含量不一，样品中的强化量也不同，所以样品的称量应控制在使低聚糖最终的进样浓度约5～10mg/mL为宜)，于100mL容量瓶中，加水约80mL于超声波振荡器中

5、振荡提取30min，加水至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤后直接这样测定。（1）奶制品（含蛋白质）的样品准确吸取50mL于小烧杯中，加25mL无水乙醇，加热使蛋白质沉淀，过滤，滤液经浓缩并用水定容至25mL刻度。（2）饮料或口服液样品准确吸取一定量的样品，加水稀释，定容至一定体积使低聚糖的最终进样浓度约5～10mg/mL。（3）果冻或布丁类样品果冻类样品先均匀搅碎，称量，加适量水并加热至60℃左右助溶．并于超声波振荡器中振荡提取，然后用水稀释至一定体积。布丁类样品可按奶制品处理。2.色谱分离条件色谱柱：Waters碳水化合物分析柱3.9mm×300m

6、m。柱温：35℃。流动相：乙腈+水（75+25）。流速：1～2mL/min。检测器灵敏度：16X。进样量：10～25μL。3.样品测定取样品处理液和对照品溶液各10～25μL注入高效液相色谱仪进行分离。以对照品峰的保留时间定性，以其峰面积计算出样液中被测物质的含量。低聚糖的分离顺序为：低聚果糖：果糖+葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖（GF2）……蔗果七糖（GF6）异麦芽低聚糖：葡萄糖、麦芽糖、异麦芽糖、潘糖（pentose）、异麦芽三糖、异麦芽四糖、异麦芽四糖以上。五、结果计算1.低聚糖占总糖的百分含量因为各组分均为同系物，所以可用面积归一法计算低聚糖各组分总面

7、积值及各组分占固形物（总糖）的百分含量。低聚果糖占总糖%=式中Sl——果糖+葡萄糖的峰面积；S2——蔗糖的峰面积；S3+……S7——蔗果三糖（GF2）……蔗果七糖（GF6）的峰面积。43异麦芽低聚糖占总糖%=式中Sl——葡萄糖的峰面积；S2——麦芽糖的峰面积；S3+……S7——异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖、异麦芽四糖以上的峰面积。注：以上数值均可在积分仪中直接读出。2.低聚糖在样品中的百分含量低聚糖%=式中S——样品中各低聚糖组分的峰面积总和；S1——对照样品溶液中各低聚糖组分的峰面积总和；m1——对照样品质量（g）；c——对照样品中各低聚糖

8、组分占固形物（总糖）实测的百分含量；①此项由结果计算5（1）求出。②如对照样品为液体基料还应乘