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《【2016年】不同刺激剂和培养环境对cd4 、 cd8 t细胞内细胞因子表达的影响【医学论文】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、医学论文-不同刺激剂和培养环境对CD4+、CD8+T细胞内细胞因子表达的影响【关键词】 流式细胞术;,T细胞亚群;,细胞因子;,刺激剂;,培养条件 CytokineexpressionofCD4+andCD8+Tcellsinducedbydifferentstimuliunderdifferentcultureconditions [Abstract] AIM:Toinvestigatetheeffectofdifferentstimulianddifferentculturecondition
2、sonthecytokineexpressionofCD4+andCD8+Tcells.METHODS:PBMCs wereisolatedfromnormalhumanperipheralbloodandculturedwiththreekindsofstimuli(PHA,antiCD3andantiCD28mAbs,PMAandionomycin)underfourdifferentcultureconditions(roomtemperature,37℃waterbath,37℃incubat
3、or,37℃and50mL/LCO2incubator)for4.5~5handintracellularcytokines(IL2,IFNγandTNFα)inTcellswereassessedbyflowcytometry(FCM).RESULTS:CytokineexpressionofCD4+andCD8+Tcellsvariedwhentreatedwithdifferentstimuliunderdifferentconditions.PMAhadthestrongeststimulat
4、iveeffectoncytokineexpressionofPBMC,whiletheeffectofantiCD3mAbwasweaker,andthatofPHAwastheweakest.DifferentcultureconditionsdidnotgreatlychangethecytokineexpressionprofileofTcells(P>0.05)exceptthattherewereveryfewcytokineproducingcellswhenPBMCswerecultu
5、redatroomtemperature.CONCLUSION:AntiCD3andantiCD28mAbs,PMAandionomycinarerecommendedforthestimulationofPBMCsanddetectionofintracellularcytokineusingFCM.CulturetemperaturebutnottheconcentrationofCO2isthemostimportantfactorduringtheshorttermTcellstimulati
6、on. [Keywords]flowcytometry;Tcellsubset;cytokine;stimulus;culturecondition [摘要] 目的:探讨不同的刺激剂和不同的培养条件对CD4+和CD8+T细胞内细胞因子表达的影响。方法:分离正常人的外周血单个核细胞（PBMC）,分别加入3种不同的刺激剂（PHA,抗CD3和抗CD28mAb,PMA和离子霉素）,置于4种不同的培养环境下（室温,37℃水浴,37℃培养箱,37℃50mL/LCO2培养箱）培养45~5h。收集细胞,以荧光素m
7、Ab标记后,用流式细胞术分析CD4+、CD8+T细胞内IL2、IFNγ和TNFα的表达。结果:CD4+和CD8+T细胞内细胞因子的表达,随着刺激剂的不同而有所差别,且在上述4种培养环境中,PMA的刺激效果最强,抗CD3mAb次之,PHA的刺激效应最弱。以上述3种刺激剂刺激后,不同培养条件对T细胞内细胞因子的表达有一定的影响。室温培养时几乎检测不到细胞因子的表达,而在37℃水浴、37℃培养箱和37℃50mL/LCO2培养箱中培养时,表达细胞因子的CD4+和CD8+T细胞的百分率差异无统计学意义（P>0.
8、05）。结论:不同刺激剂体外刺激T细胞表达细胞因子的效应不同,依次为PMA和离子霉素>抗CD3和抗CD28mAb>PHA。体外刺激培养的T细胞活化过程中,温度是重要的条件,CO2无明显影响。 [关键词]流式细胞术;T细胞亚群;细胞因子;刺激剂;培养条件 应用荧光素标记的抗细胞表面抗原的单克隆抗体（mAb）和抗细胞因子的mAb,流式细胞术不仅可检测单个细胞内的多种细胞因子,还可区分表达特定细胞因子的细胞亚群[1]。但该技术涉及的环节较多,因此,需对各方
