以疾病为主线的医学遗传学实验-细胞分子遗传学实验手册

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1、以疾病为主线的医学遗传学实验细胞分子遗传学实验手册编者：陈慧梅蒋爱芹凌立君南京大学医学院二○一四年五月54目录第一章细胞分子生物学常用仪器设备及操作31.常用仪器设备…………………………………………………………………………...32.细胞培养实验室的设置及设备……………………………………………………...43.常用操作………………………………………………………………………………..10第二章细胞与分子生物学常用实验技术…………..131.分子实验技术………………………………………………………………………….132.细胞实验技术………………………………………

2、………………………………….13第三章细胞遗传学实验14实验一考马斯亮蓝染色法显示细胞骨架………………………………………...14实验二台盼蓝染色及细胞计数实验……………………………………………….16实验三细胞的传代培养实验………………………………………………………..17实验四细胞的冻存与复苏实验……………………………………………………..19实验五PEG介导的细胞融合实验………………………………………………….21实验六肝细胞的原代分离及培养………………………………………………….23实验七MTT法检测细胞活力实验………………………………………………

3、…25实验八涂片染色法观察骨髓自然凋亡细胞……………………………………..27实验九人类外周血染色体标本的制备……………………………………………29实验十G显带染色体标本制备与识别……………………………………………31第四章生化分子遗传学实验…33实验一血清肌酸激酶活性测定……………………………………………………..33实验二血清铜蓝蛋白测定实验……………………………………………………..35实验三外周血细胞基因组DNA的提取(NaI法)………………………………37实验四碱裂解法提取质粒DNA…………………………………………...............3

4、9实验五聚合酶链式反应（绿色荧光蛋白基因的PCR扩增）……………….42实验六限制性内切酶消化实验…………………………………………………….'44实验七琼脂糖凝胶电泳实验……………………………………………………….’45实验八大肠杆菌感受态细胞的制备及转化………………………………....47第五章临床群体遗传学实验…………………………………..50实验一PTC尝味实验…………………………………………………………………50实验二遗传咨询……………………………………………………………………….5154第一章细胞分子生物学常用仪器设备及操作1.常用仪器设备1.1

5、测量设备²固体的测量设备：各种量程、精度的电子天平等，用以称取一定质量的固体药品²液体的测量设备：量筒、移液管、微量移液器等，用于量取一定体积的液体试剂。²pH值的测量设备：pH试纸，pH计，直接测量溶液的pH值。²光密度值的测量设备：分光光度计，通过OD值反映核酸、菌液等的浓度。1.2灭菌消毒及净化设备²高压蒸汽灭菌器：常用于玻璃器皿、培养基、试剂等在使用前的灭菌和一些有潜在危险的细菌、病毒等在丢弃前的灭菌。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃，维持≥20分钟。²干热灭菌烘箱：用于金属器械、瓷器和玻璃器皿（如剪刀、镊子、三角瓶和培养皿等）的干热灭菌

6、，温度可达160℃，不适合橡胶、塑料及大部药品的灭菌。²除菌过滤器：用于不耐高温、高压的试剂灭菌（如抗生素、维生素或血清等）。常用滤膜孔径为0.22μm（能去除样品、流动相中极细颗粒的要求，可以达到GMP或者药典规定的除菌99.99%的要求）或0.45μm（能滤除大多数细菌微生物，降低细菌负荷；常规样品、流动相过滤，能够满足一般色谱要求）。²紫外灯：用于无菌室和超净台等空气灭菌。²超净工作台：原理是由鼓风机驱动空气，经过低、中效的过滤器后，通过工作台面，使实验操作区域成为无菌的环境。1.3温控及干燥设备²冰箱及冷柜：用于试剂、酶、抗生素和菌种等的保藏。4℃

7、合适贮存某些溶液、试剂、药品等。-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。-80℃合适某些长时间低温保管的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特别的低温处置消化液等的保管。0-10℃的层析冷柜合适低温条件下的电泳、层析、透析等试验。²液氮罐：用于长期储存细胞、病毒或某些微生物，或为实验提供液氮。54²培育箱：37℃恒温箱用于细菌的平板培育及分子生物学试验。²恒温培育摇床：用于大肠杆菌等生物工程菌种的扩增。²水浴锅：用于保温并进行各类试验。25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验，各种生物化学酶反响等试验的保温。含低温的水浴槽能

8、够用于分子生物学的质粒与基因片段的衔接等试验及用于42℃的大肠杆菌