磺胺类兽药免疫胶体金快速检测试纸条的研制

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1、分类号：ＴＳ２０１．６学校代码：１００５７密级：（秘密、机密、绝密）研究生学号：２００６８１３５０７磺胺类兽药免疫胶体金快速检测试纸条的研制ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＣｏｌｌｏｉｄａｌＧｏｌｄＩｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃＲａｐｉｄＴｅｓｔＳｔｒｉｐｆｏｒｔｈｅＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＳｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓＲｅｓｉｄｕｅｓ专业名称：营养与食品卫生学（理）指导教师姓名：王硕教授研究生姓名：张佳宜申请学位级别：理学硕士论文提交日期：２００９年２月论文课题来源：“十一五”国家科技支撑计划（Ｎｏ．２００６ＢＡＤ０５Ａ０６）

2、学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：渊｛蟹日期：柳ｊ，年≥月码’日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的

3、，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：孑尺１彳笙日期：加，年弓月玎日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部

4、或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密〔１（请在方框内打“寸’），在年解密后适用本授权书。本学位论文属于，’．．不保密、ＩＺｌ（请在方框内打“寸’）。日期：州年＞月玎日’作者签名，ｊ【氛ｊ亨宦ＥＩＩ钥．功巧年）月吁日导师签名ｔ了Ｚ切摘要本论文利用胶体金作为标记物，根据竞争抑制免疫层析原理，对磺胺类兽药残留快速检测试纸条方法进行了系统的研究。通过优化各项实验指标，利用磺胺类药物多克隆抗体和半抗原偶联物（Ｓ４．ＯＶＡ）研制出磺胺类多残留免疫层析试纸条；利用抗磺胺二甲嘧啶多克隆抗

5、体和半抗原偶联物（ＳＭＺ．ＯＶＡ）研制出磺胺二甲嘧啶免疫层析试纸条。采用柠檬酸三钠法制备４０ｎｎｌ胶体金，电镜鉴定后标记多克隆抗体，半抗原－ＯＶＡ和羊抗兔二抗分别作为检测带和质控带包被在硝酸纤维素膜上，金标记抗体喷涂在玻璃纤维垫上，制成免疫层析快速检测试纸条。磺胺二甲嘧啶试纸条的方法检出限为１“ｇ／Ｌ，磺胺类多残留试纸条方法检出限：磺胺噻唑、磺胺异嗯唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺吡啶分别为２“ｇ／Ｌ、２ｐｇ／Ｌ、５“ｇ，Ｌ、５．ｇ／Ｌ、５ｐｇ／Ｌ。以猪肉、鸡肉、牛奶、鲫鱼为实际样品（经ＨＰＬＣ检测为阴性样品）进行磺胺类药物

6、的添加回收实验，以甲醇为提取溶剂，磷酸盐缓冲液ＰＢＳ．０．０５％Ｔｗｅｅｎ为基质掩蔽剂，稀释一定倍数后即可消除基质影响，用于试纸条的检测。五种磺胺药物在四种样品基质中的最低检出限均等于或低于ＭＲＬ（１００ｐｇ／ｌ（ｇ）：磺胺二甲基嘧啶在四种样品基质中的最低检出限均等于或低于ＭＲＬ（２０ｐｇ／ｋｇ）．通过高效液相色谱法验证了试纸条检测方法的有效性。结果表明试纸条在其检测范围内与ＨＰＬＣ检测结果一致性较好，验证了该检测方法的有效性。试纸条分别密封保存于４℃、３７１２一段时间后做稳定性测试，结果表明在４℃密封干燥条件下试纸条放置６个月

7、内可保持检测结果的可靠性。该试纸条检测方法灵敏度高，快速，简便，１０ｍｉｎ内即可得出检测结果。所研制的两种试纸条适用于动物源性食品中磺胺类药物残留的大批量现场检测。关键词ｔ磺胺类药物：胶体金；免疫层析试纸条；快速检测ＡＢＳＴＲＡＣＴＡｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅａｓｓａｙｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｏｆｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｕｓｉｎｇｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ鹪ｔｒａｃｅｒｆｏｒｔｈｅｒａｐｉｄｏｎ－ｓｉｔｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓｒｅｓｉｄｕｅｓｉｎｆｏｏｄｓａｍｐｌｅｓＷａＳｓｔｕｄｉｅｄ．Ａｆｔｅ

8、ｒｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇｔｈｅｖａｒｉｏｕｓｆａｃｔｏｒｓａｎｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｔｅｓｔ，ｕｓｉｎｇｔｈｅａｎｔｉ－ｓｕｌｆｏｎａｍｉ＆ｓｐｏｌｙｃｌｏｎｅａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｓ４－ＯＶＡ，ｔｈｅａｎｔｉ－ＳＭＺａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄＳＭＺ－ＯＶＡ，ｔ