肿瘤坏死因子α在铜绿假单胞菌肺炎中的变化及意义

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1、肿瘤坏死因子α在铜绿假单胞菌肺炎中的变化及意义【摘要】目的：探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)在铜绿假单胞菌肺部感染发病中的作用。方法:90只小鼠随机分成对照组、模型组与抗体组，每组30只。通过气管插管，在气管内注入铜绿假单胞菌建立小鼠肺部感染模型，抗体组手术前6h静脉内注入0.2mL/kgTNFα抗体，对照组注入相同剂量的PBS液，分别在0、3、6、12、24h不同时间点收集支气管肺泡灌洗液，用ELISA法检测各组不同时间点支气管肺泡灌洗液中TNFα的含量，并观察小鼠1周后的死亡率。结果：模型组

2、和抗体组支气管肺泡灌洗液中TNFα含量在3h时已开始升高，6h达到高峰，12、24h逐渐降低，模型组明显高于抗体组(P<0.05～0.01)，而两组均显著高于对照组(P<0.01)。1周后模型组小鼠死亡率(73.3%)明显高于抗体组(43.3%)(P<0.01)，两组死亡率均显著高于对照组(3.3%)(P<0.01)。结论:TNFα在铜绿假单胞菌肺炎发病过程中起着非常重要作用，抑制其过度释放可减缓病情.【关键词】肿瘤坏死因子α;铜绿假单胞菌肺炎;支气管肺泡灌洗液ABSTRA

3、CT]Objective:Toinvestigatetheroleoftumornecrosisfactorα(TNFα)inthecourseofpseudomonasaeruginosapneumonia.Methods:90micelydividedintothreegroups:modelgroup,antibodygroupandcontrolgroup.Pseudomonasaeruginosastrainicethroughtrachealcannulatoinducepneumoni

4、aineachgroup.HoL/kg,iv)totheantibodygroupandthecontrolgroup,separately.Bronchoalveolarlavagefluid(BALF)oniaeasuredfortheTNFαconcentrationelinkedimmunosorbentassay(ELISA)ineachgroup.Results:Inbothmodelgroupandtheantibodygroup,TNFαlevelofBALFstartedtoin

5、creasegradually3hafterpneumoniaonset,reachedthepeakat6h,decreasedafter12h,andodelgroupandtheantibodygroup,TNFαleveloftheformerortalityofthemodelgroup(73.3%)ongthelattertortality(P<0.01).Conclusion:SuppressionexcessiveTNFαreleasecanrelievepneumonia,a

6、sTNFαhasanimportantroleinthecourseofpseudomonasaeruginosapneumonia.　　[KEYH琼脂中-70℃冻存。复苏：划线接种于琼脂平板，CO2孵箱37℃中培养24h，每24小时转种1次以保持PA活性。使用前1～2h，采用麦氏管目测法和分光光度仪比色法，用无菌双蒸水配成2个麦氏单位浓度(6×108CFU/mL)。　　1.3肺炎模型的建立　　用乙醚吸入麻醉后，沿小鼠颈正中皮肤切开并开胸，从甲状腺水平将气管剪开一小口，插入输液用16号针头并结扎固定

7、，针头后软管接注射器，每只小鼠从气管内直接灌入0.2mL麦氏单位菌株，然后缝合。对照组注入相同剂量的无菌PBS液;抗体组手术前6h静脉内注入0.2mL/kgTNFα抗体(购于上海晶天生物科技有限公司，美国BioL，停留1min，反复3次，回收量>9O%，收集BALF,1000r/min离心10min，13000×g离心30min，取其上清液以备检测。　　1.5TNFα测定　　采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNFα，先包被TNF单克隆抗体(单抗)于PVC板上，样品中的TNFα

8、与单抗结合后，再与辣根过氧化酶标记的兔抗TNFa多克隆抗体(多抗)结合，过氧化酶与底物反应，终止后用酶联免疫测定仪(酶标仪)测定450nm处吸光度值，结果与标准曲线比较，测定TNFα含量。TNFα试剂盒购于深圳晶美生物技术有限公司，为美国GeneMay公司生产。　　1.6统计学处理　　采用SPSS12.0统计软件进行统计分析，计量资料的比较采用方差分析，率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1不